针对MYOC基因RNAi慢病毒载体的优化及筛选

目的建立针对MYOC基因RNAi慢病毒载体的优化及筛选方法,为研究后续突变基因的功能奠定基础。方法 Western Blot筛选RNAi有效靶点,Real-time PCR检测小梁细胞MYOC基因Knock Down效率。结果 Western blotting结果显示含有敲减质粒的组别其蛋白表达明显减少;Real-time PCR结果显示在荧光显微镜下观察,与对照组相比含有敲减质粒的组别其MYOC基因的表达明显下降,1#、2#、3#具有确切的干扰效果。结论经过Western blotting及Real-time PCR方法检测所构建的4个干扰靶点的敲减效率,证实RNAi慢病毒干扰效果可靠,且两种方法结果一致,可随机选择1#、2#、3#中的任一位点作为后续干扰靶点。