抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体的表达及初步活性检测 |
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作者姓名: | Dai LJ Yan CW Li SZ Chen L Li XY Shan RH Yu XW Tang XB |
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作者单位: | 1. 哈尔滨医科大学,附属第二医院药学部,黑龙江哈尔滨150081 2. 哈尔滨医科大学,药学院生物制药学教研室,黑龙江哈尔滨150081 |
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基金项目: | 哈尔滨市科技创新人才研究专项资金 |
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摘 要: | 目的:构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/抗CD3双特异单链抗体(bscVEGFR2×CD3),及亲和活性测定。方法:设计抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体基因序列,由公司合成并亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),筛选高效分泌表达bscVEGFR2×CD3的克隆株。表达产物经Ni-NTA柱纯化,120 g/L SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用流式细胞术(FCM)检测生物学活性。结果:bscVEGFR2×CD3重组表达载体测序证实序列正确。bscVEGFR2×CD3能够在CHO细胞中进行分泌表达,筛选出6株高表达克隆株。120 g/L SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)约56 000有1条带,与预期相符,Western blot证明anti-His抗体能与这条蛋白条带发生特异性结合。FCM检测bscVEGFR2×CD3能与CD3+jurkat细胞和VEGFR2+A375细胞特异性结合。结论:成功构建和表达抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体,该抗体具有与VEGFR2、CD3特异性结合的免疫学活性。
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关 键 词: | 双特异单链抗体 CD3 VEGFR2 |
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