| 人血清反应因子基因的原核表达及鸡卵黄多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 卫星,郭爱林,苏健,陈志红,唐红艳,谢至.人血清反应因子基因的原核表达及鸡卵黄多克隆抗体的制备[J].岭南心血管病杂志,2006,12(6):424-427. |
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| 作者姓名： | 卫星 郭爱林 苏健 陈志红 唐红艳 谢至 |
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| 作者单位： | 1. 广东省军区机关门诊部,广州,510080
2. 广东省人民医院医学研究中心,广州,510080 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金资助项目(5001160) |
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| 摘 要： | 目的 在原核系统中表达人血清反应因子(serum response factor,SRF)基因,制备鸡卵黄抗SRF抗体并鉴定其特性.方法 构建SRF表达载体PGEX-T-2-SRF,并在大肠杆菌中以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达.表达产物经谷胱甘肽-S转移酶(glutathione-S-transferase,GST)亲和层析柱纯化后,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)进行鉴定.用纯化的SRF免疫海蓝白母鸡,制备鸡抗SRF抗体.抗体的效价及特异性用蛋白质印迹技术进行测定和分析,免疫荧光鉴定其在心肌细胞中的定位.结果 构建的重组质粒PGEX-4T-2-SRF在大肠杆菌中得到高表达,诱导表达的蛋白存在于包涵体和细菌裂解上清液中,纯化的SRF经SDS-PAGE鉴定呈单一条带.以纯化的SRF免疫制备了鸡抗SRF抗体.蛋白质印迹技术结果表明,该抗体可与原核表达的SRF特异性结合,抗体效价为1:5000.免疫荧光证实该抗体可以和心肌细胞的细胞核特异性结合.结论 在原核细胞中表达了SRF制备的鸡抗SRF的抗体对SRF能进行特异性结合.
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| 关 键 词： | 血清反应因子 基因表达 多克隆抗体 鸡 |
| 文章编号： | 1007-9688(2006)06-0424-04 |
| 修稿时间： | 2006年10月28 |
Prokaryotic expression of serum response factor and preparation of egg yolk antibody against serum response factor |
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| WEI Xing,GUO Ai-lin,SU Jian,CHEN Zhi-hong,TANG Hong-yan,XIE Zhi.Prokaryotic expression of serum response factor and preparation of egg yolk antibody against serum response factor[J].South China Journal of Cardiovascular Diseases,2006,12(6):424-427. |
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| Authors: | WEI Xing GUO Ai-lin SU Jian CHEN Zhi-hong TANG Hong-yan XIE Zhi |
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| Institution: | WEI Xing2,GUO Ai-lin1,SU Jian1,CHEN Zhi-hong1,TANG Hong-yan1,XIE Zhi1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Serum response factor Gene expression Polyclonal antibody Hen |
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