| 重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP的构建及其对UT-7/Epo细胞感染效率的检测 |
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| 引用本文： | 刘雪莉,宋敬东,郭小娟,王敏,曾茁壮,洪涛.重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP的构建及其对UT-7/Epo细胞感染效率的检测[J].第三军医大学学报,2012,34(9):862-865. |
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| 作者姓名： | 刘雪莉 宋敬东 郭小娟 王敏 曾茁壮 洪涛 |
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| 作者单位： | 刘雪莉 (中国疾病预防控制中心病毒病所,北京,100052) ； 宋敬东 (中国疾病预防控制中心病毒病所,北京,100052) ； 郭小娟 (中国疾病预防控制中心病毒病所,北京,100052) ； 王敏 (中国疾病预防控制中心病毒病所,北京,100052) ； 曾茁壮 (中国疾病预防控制中心病毒病所,北京,100052) ； 洪涛 (中国疾病预防控制中心病毒病所,北京,100052) ； |
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| 摘 要： | 目的构建携带报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,并且研究该病毒对人白血病细胞UT-7/Epo的感染效率及其在细胞中的复制。方法先通过分子克隆技术构建重组腺病毒质粒pAd5F11pTPEGFP,然后利用脂质体转染法,将其转染至HEK293细胞包装出重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,经酶切和PCR鉴定正确后,扩增并纯化得到滴度较高的重组腺病毒。以空载体病毒Ad5GFP作为对照,将纯化的重组腺病毒感染UT-7/Epo细胞,经流式细胞仪检测在不同感染复数(MOI)下荧光阳性细胞比例,即为Ad5F11pTPEGFP病毒对UT-7/Epo细胞的感染效率,同时将冻融后的重组腺病毒感染的UT-7/Epo细胞上清感染HEK293细胞,48 h后观察GFP在HEK293细胞中的表达。结果成功制备了重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞的感染效率明显高于空载体对照病毒Ad5GFP,在MOI为200时,感染效率达98.2%,而空载体病毒在MOI为200时,对UT-7/Epo细胞的感染效率仅为29.7%。感染了重组腺病毒的UT-7/Epo细胞冻融上清感染新的HEK293细胞后,荧光显微镜下观察到GFP的表达。结论成功构建了重组腺病毒Ad5F11pTPEGFP,其对UT-7/Epo细胞有较高的感染效率,并能在其中复制。
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| 关 键 词： | 重组腺病毒 端粒酶 纤维顶球 UT-7/Epo细胞 |
Construction of a recombinant adenovirus Ad5F11p-TPEGFp and evaluation of its transfection efficiency to UT-7/Epo cells |
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| Liu Xueli,Song Jingdong,Guo Xiaojuan,Wang Min,Zeng Zhuozhuang,Hong Tao.Construction of a recombinant adenovirus Ad5F11p-TPEGFp and evaluation of its transfection efficiency to UT-7/Epo cells[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2012,34(9):862-865. |
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| Authors: | Liu Xueli Song Jingdong Guo Xiaojuan Wang Min Zeng Zhuozhuang Hong Tao |
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| Institution: | (Institute of Viral Disease,Chinese Centre for Disease Control and Prevention,Beijing,100052,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | recombinant adenovirus telomerase fiber UT-7/Epo cells |
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