温肾阳方及其拆方通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化

目的?探讨温肾阳方及方中单味中药骨碎补、淫羊藿是否通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化。方法?分别采用温肾阳方（0.42 g生药/mL）、骨碎补（0.09 g生药/mL）及淫羊藿（0.09 g生药/mL）煎剂和等体积生理盐水给大鼠灌胃，制备含药血清，分离孕12.5天小鼠肢芽干细胞进行微团培养，含药血清干预后，CCK-8法检测肢芽干细胞增殖能力，阿尔新蓝染色检测软骨分化能力，IPP软件统计软骨球个数及面积，Real-time PCR法检测Col2a1及Aggrecan表达水平。采用293T细胞，脂质体转染TGF-β信号通路报告基因4×SBE，荧光素酶实验分析各组对TGF-β信号通路的调节作用。采用TGF-β信号通路抑制剂SB431542抑制肢芽干细胞中TGF-β信号通路，进行阿尔新蓝染色及软骨细胞外基质检测。结果?与空白组比较，温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组干预48 h和72 h后小鼠肢芽干细胞增殖均增强（P<0.01，P<0.05）。阿尔新蓝染色显示，温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组软骨球个数及面积增加（P<0.05），软骨细胞基质Col2a1及Aggrecan的表达增强（P<0.01）。荧光素酶实验发现，与空白组比较，各中药组TGF-β信号通路活性上调（P<0.01，P<0.05）。加入TGF-β信号通路抑制剂SB431542后，与空白组比较，抑制剂组软骨球个数及面积均明显减少（P<0.01）；而温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组软骨生成抑制显著缓解（P<0.05），但与空白组比较，软骨球个数及面积仍明显减少（P<0.01，P<0.05），Col2a1及Aggrecan水平也有相似的变化趋势（P<0.01）。结论?温肾阳方及温肾阳药骨碎补、淫羊藿可以部分通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化。