hsa-miR-128慢病毒载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响 |
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作者姓名: | 方丹东 李俊堂 杨韬 张雷鸣 皇甫罗锴 王曦 张剑宁 杨安钢 |
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作者单位: | 方丹东 (第四军医大学 西京医院神经外科) ; 李俊堂 (洛阳市第150中心医院,河南洛阳 471031) ; 杨韬 (第四军医大学 免疫学教研室,陕西西安,710032) ; 张雷鸣 (第四军医大学 免疫学教研室,陕西西安,710032) ; 皇甫罗锴 (第四军医大学 海军总院神经外科,北京,100037) ; 王曦 (第四军医大学 免疫学教研室,陕西西安,710032) ; 张剑宁 (第四军医大学 免疫学教研室,陕西西安,710032) ; 杨安钢 (第四军医大学 免疫学教研室,陕西西安,710032) |
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摘 要: | 目的:构建含hsa-miR-128-1和hsa-miR-128-2前体的慢病毒表达载体,建立能够稳定表达目的基因的人胶质瘤U87细胞株。研究hsa-miR-128对胶质瘤细胞增殖的影响。方法:扩增hsa-miR-128前体片段,克隆入Pentr3c载体,利用LR clonaseⅡ酶将目的片段转接于Plenti6.3质粒,包装病毒,以改构的Plenti6.3-mCherry载体包装的病毒为对照,感染人胶质瘤U87细胞,通过Blasticidin筛选出能够稳定表达抗生素抗性的细胞株。荧光显微镜观察mCherry的荧光表达,实时荧光定量检测miR-128的表达量,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞增殖。结果:成功构建重组慢病毒载体Plenti6.3-miR-128-1和Plenti6.3-miR-128-2,经Blasticidin筛选细胞株、mCherry荧光表达和实时荧光定量PCR验证,成功包装出慢病毒。病毒滴度测定在1.1×107-8.3×107TU/mL之间,细胞周期和MTT结果提示miR-128-1和miR-128-2高表达的U87细胞株均表现增殖抑制。结论:成功构建了分别含有两种hsa-miR-128前体的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达hsa-miR-128的U87细胞株。miR-128-1和miR-128-2均抑制胶质瘤U87细胞增殖。
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关 键 词: | hsa-miR-128 慢病毒构建 U87细胞 细胞增殖 |
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