| 人颗粒溶素与EGFP基因融合表达载体的构建及其在鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达 |
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| 引用本文： | 伊正君,朱道银,李俊明,何永林,杨健,李娜. 人颗粒溶素与EGFP基因融合表达载体的构建及其在鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达[J]. 医学争鸣, 2005, 26(23): 2125-2128 |
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| 作者姓名： | 伊正君 朱道银 李俊明 何永林 杨健 李娜 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学微生物学与免疫学教研室,重庆,400016;重庆医科大学微生物学与免疫学教研室,重庆,400016;重庆医科大学微生物学与免疫学教研室,重庆,400016;重庆医科大学微生物学与免疫学教研室,重庆,400016;重庆医科大学微生物学与免疫学教研室,重庆,400016;重庆医科大学微生物学与免疫学教研室,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的:克隆人天然颗粒溶素(granulysin,GLS)的编码序列并构建与绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合的真核表达载体,观察人GLS在鼠巨噬细胞株RAW264.7中的表达.方法:提取培养并经同种异型抗原激活的人细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞总RNA,经逆转录后以套式PCR方法扩增出GLS的编码序列,插入pEGFP-C1质粒,鉴定正确后转染RAW264.7细胞,采用荧光显微镜及RT-PCR法检测融合蛋白及GLS的表达,采用免疫细胞化学法确证表达产物的免疫反应性.结果:成功扩增出了人GLS完整编码序列的cDNA,经PCR及酶切、测序鉴定证明得到了读码框正确的融合蛋白重组子并在靶细胞中得到了成功表达,表达产物具有良好的免疫反应性.结论:人天然GLS能够在鼠巨噬细胞株RAW264.7中以融合蛋白的形式表达,其表达产物具有良好的免疫反应性.
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| 关 键 词： | 颗粒溶素 绿色荧光蛋白 巨噬细胞 套式PCR 免疫反应性 |
| 文章编号： | 1000-2790(2005)23-2125-04 |
| 收稿时间： | 2005-03-15 |
| 修稿时间： | 2005-08-23 |
Construction of a fusion gene expression vector containing human granulysin and green fluorescent protein gene and its expression in murine macro-phage RAW264.7 |
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| YI Zheng-Jun,ZHU Dao-Yin,LI Jun-Ming,HE Yong-Lin,YANG Jian,LI Na. Construction of a fusion gene expression vector containing human granulysin and green fluorescent protein gene and its expression in murine macro-phage RAW264.7[J]. Negative, 2005, 26(23): 2125-2128 |
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| Authors: | YI Zheng-Jun ZHU Dao-Yin LI Jun-Ming HE Yong-Lin YANG Jian LI Na |
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| Affiliation: | Department of Microbiology and Immunology, Chongqing University of Medical Science, Chongqing 400016, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | granulysin green fluorescent protein macrophage nested-PCR immunoreactivity |
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