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| CEA启动子启动双自杀基因CD/TK重组AdEasy XL腺病毒构建 | |
| 引用本文： | 王天宝,汪建平,董文广,钟女奇,周军. CEA启动子启动双自杀基因CD/TK重组AdEasy XL腺病毒构建[J]. 中华实验外科杂志, 2005, 22(10): 1180-1182 |
| 作者姓名： | 王天宝 汪建平 董文广 钟女奇 周军 |
| 作者单位： | 1. 中山大学附属第三医院胃肠外科 2. 510080,广州,中山大学附属第一医院胃肠外科 3. 中山大学实验动物中心 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(39970335) |
| 摘 要： | 目的构建含有CEA启动子(CEApromoter,Cp)启动的双自杀基因CD与TK的复制缺陷型腺病毒。方法设计带有限制性内切酶酶切序列的PCR引物。在2μlT4DNAligase作用下,Cp插入pAdTrack(pAT)的MCS,形成pAT.Cp;CD插入pAT.Cp的MCS,形成pAT.Cp.C;TK插入pAT.Cp.C的MCS,形成pAT.Cp.C.T。5μgpAT.Cp.C.T经4μlPmeI线化后,转化BJ5183AD1,1μlPacI酶切鉴定。重组AdEasy质粒转化XL10Gold细胞,大量扩增提取纯化,转染5×105AD293细胞,荧光显微镜观察,制备带有Cp.C.T重组腺病毒(recombinantadenoviruswithCp.C.T,RACp.C.T),测定病毒滴度。结果pAT.Cp,pAT.Cp.C,pAT.Cp.C.T双酶切以及PCR均见长约500bp的Cp,1300bp的CD,1100bp的TK。对照质粒DNA转化BJ5183AD1效率为7.36×106cfu/μg。线化pAT.Cp.C.T转化BJ5183AD1,形成重组AdEasy质粒DNA,PacI酶切见典型长约3.0或4.5kb与30.0kbDNA片断。重组质粒转染AD293出现绿色荧光。RACp.C.T滴度为5.67×107pfu/ml。结论RACp.C.T构建正确;AdEasyXL腺病毒载体系统转导Cp.C.T具有高效性,易于观察转染效果。 |
| 关 键 词： | 结肠肿瘤 癌胚抗原 胸苷激酶 腺病毒载体 |
| 收稿时间： | 2004-11-26 |
| 修稿时间： | 2004-11-26 |
The construct of replication deficient AdEasy XL adenovirus containing CEA promoter, CD and TK gene |
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| WANG Tian-bao, WANG Jian-ping, DONG Wen-guang,et al.. The construct of replication deficient AdEasy XL adenovirus containing CEA promoter, CD and TK gene[J]. Chinese Journal of Experimental Surgery, 2005, 22(10): 1180-1182 | |
| Authors: | WANG Tian-bao WANG Jian-ping DONG Wen-guang et al. |
| Affiliation: | WANG Tian-bao, WANG Jian-ping, DONG Wen-guang, et al. |
| Abstract: | |
| Keywords: | Colorectal neoplasm CEA Cytosine deaminase Thymidine kinase Adenoviral vector |
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