GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体的构建及Xba Ⅰ甲基化位点的应用 |
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作者姓名: | 何芬 范海虹 谢瑶 牛道立 |
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作者单位: | 广州医学院附属第一医院放疗科,广州,510120;中山大学附属第一医院预防保健科,广州,510080;中山大学基础医学院解剖学教研室,广州,510080 |
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摘 要: | 目的构建GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体并探讨XbaI甲基化位点在构建中的应用,为构建GM-CSF基因重组腺病毒及更方便地利用XbaⅠ多克隆位点打下基础。方法体外分离小鼠脾细胞,经ConA刺激,用含两种不同的XbaⅠ位点毗邻碱基的引物RT-PCR获取小鼠GM-CSF基因,经XbaⅠ及XbaⅠ双酶切后分别定向克隆入pAdTrack-CMV重组腺病毒穿梭载体中,比较两种重组载体酶切鉴定的效率并通过测序验证。结果成功逆转录得到小鼠GM-CSF基因并克隆入pAdTrack-CMV中,测序结果与预期一致。酶切鉴定显示由于XbaI位点毗邻碱基的不同导致甲基化的XbaⅠ位点在克隆菌株中不能被有效切开。结论成功构建GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体,XbaⅠ位点对甲基化敏感。
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关 键 词: | 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 重组腺病毒 甲基化 |
收稿时间: | 2006-03-25 |
修稿时间: | 2006-03-25 |
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