基于Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca2+载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用 |
| |
引用本文: | 丁芮,周鹏,王翔,汤同娟,王恩宇,洪星辉,王靓,黄金玲.基于Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca2+载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(12):1-11. |
| |
作者姓名: | 丁芮 周鹏 王翔 汤同娟 王恩宇 洪星辉 王靓 黄金玲 |
| |
作者单位: | 1.安徽中医药大学,合肥 230012;2.安徽省中医药科学院 中西医结合研究所,合肥 230012;3.中药复方安徽省重点实验室,合肥 230012 |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(81573864) |
| |
摘 要: | 目的 探讨小陷胸汤对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响,并探讨其可能的机制。方法 通过CB-DOCK在线平台(http: //clab. labshare. cn /cb-dock /)预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子(NFAT)分子对接。使用质量浓度为10 μg·L-1的TGF-β1建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型,将MGC-803细胞分为空白组、模型组、小陷胸汤组(0.1、0.2、0.4 g·L-1),为进一步探讨Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路在小陷胸汤抑制胃癌中的关键参与作用,将Wnt5a过表达质粒转染MGC-803细胞,分为空白质粒组、Wnt5a-OE组、空白质粒+小陷胸汤(0.4 g·L-1)组和Wnt5a-OE+小陷胸汤(0.4 g·L-1)组。分别使用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法、Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫荧光法检测MGC-803细胞活力、侵袭能力、迁移能力、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指蛋白(Snail)、Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路关键蛋白Wnt5a、钙调神经磷酸酶(CaN)、NFAT1、磷酸化(p)-NFAT1和NFAT1核蛋白表达以及细胞Ca2+浓度变化。结果 分子对接提示小陷胸汤作用于Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路。与模型组比较,小陷胸汤(0.1、0.2、0.4 g·L-1)能明显促进MGC-803细胞活力的丧失,可通过基质凝胶侵入Transwell下室抑制细胞,并以剂量依赖性的方式减缓细胞划痕愈合,并促进E-cadherin的表达,抑制N-cadherin、Vimentin和Snail的表达(P<0.05,P<0.01)。进一步实验表明,与模型组比较,小陷胸汤可以抑制Wnt5a、CaN、NFAT1和p-NFAT1的表达,降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性,从而降低细胞Ca2+浓度,且可逆转Wnt5a的作用(P<0.05,P<0.01)。结论 小陷胸汤可通过Wnt5a/Ca2+/NFAT通路减弱人胃癌MGC-803细胞的侵袭转移和上皮间质转化(EMT),从而减弱TGF-β1诱导的促瘤作用。这提示小陷胸汤可能通过调节胃癌的侵袭、转移和EMT来预防和治疗胃癌。
|
关 键 词: | 小陷胸汤 胃癌 侵袭转移 上皮间质转化 Wnt5a/Ca2+/活化T细胞核因子(NFAT)信号通路 |
收稿时间: | 2021/12/8 0:00:00 |
|
| 点击此处可从《中国实验方剂学杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国实验方剂学杂志》下载免费的PDF全文 |
|