基于Wnt/β-catenin通路探讨加味黄芪甘草汤对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响 |
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作者姓名: | 滕港 张芮 周静 芮红丽 胡燕灵 周雨婷 宋金香 张念志 |
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作者单位: | 1.安徽中医药大学 第一临床医学院,合肥 230031;2.安徽中医药大学 第一附属医院,合肥 230031 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(82174312);安徽省中医肺病临床医学研究中心项目(皖科社[2020]41号);安徽省应急科研攻关项目(202004a07020005) |
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摘 要: | 目的 探究加味黄芪甘草汤冻干粉对人非小细胞肺癌细胞A549、PC9增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响及可能的机制。方法 采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测1.0,2.0,4.0,8.0,12.0 g·L-1加味黄芪甘草汤冻干粉对非小细胞肺癌细胞增殖的影响;将A549、PC9细胞分为空白组和加味黄芪甘草汤低、中、高组(2.0,4.0,8.0 g·L-1);平板克隆检测加味黄芪甘草汤对细胞克隆能力的影响;Hoechst 33342染色检测加味黄芪甘草汤对细胞凋亡的影响;划痕实验和Transwell小室实验分别检测其迁移与侵袭能力;微球体形成实验观察加味黄芪甘草汤对肿瘤细胞成球能力的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测多能干细胞维持基因八聚体转录因子(Oct-4)、人性别决定区y框蛋白2(Sox2)、同源盒转录因子(Nanog)的mRNA表达水平,评估肿瘤干细胞活性;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白(Bad),Bcl-2相关X蛋白(Bax),活化与非活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3、Caspase-3),E-钙黏连蛋白(E-cadherin),N型钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2),β-连环蛋白(β-catenin),c-核蛋白类基因(c-Myc),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),锌指转录因子(Slug)蛋白表达水平。结果 与空白组比较,A549、PC9细胞经1.0,2.0,4.0,8.0,12.0 g·L-1加味黄芪甘草汤冻干粉处理24 、48 h,细胞增殖能力均被明显抑制,并呈浓度与时间依赖性(P<0.05,P<0.01);加味黄芪甘草汤低、中、高组均能抑制A549、PC9细胞的克隆能力(P<0.05,P<0.01);加味黄芪甘草汤高组均能诱导A549、PC9细胞凋亡(P<0.01);加味黄芪甘草汤低、中、高组均能抑制A549、PC9细胞侵袭、迁移能力(P<0.05,P<0.01);经加味黄芪甘草汤低、中、高组处理后,A549细胞的微球体体积明显缩小,A549、PC9细胞Oct-4、Sox2和Nanog mRNA表达量均降低(P<0.05,P<0.01);加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05,P<0.01),上调促凋亡蛋白Bad、Bax及cleaved Caspase-3/Caspase-3的表达(P<0.05,P<0.01);加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞MMP-2、N-cadherin及Vimentin的表达(P<0.05,P< 0.01),上调E-cadherin的表达(P<0.05,P<0.01);加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞β-catenin、c-Myc、Cyclin D1及Slug表达(P<0.01)。结论 加味黄芪甘草汤可抑制人非小细胞肺癌A549、PC9细胞的增殖、侵袭、迁移、肿瘤干细胞活性及上皮间质转化,并能诱导凋亡,作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。
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关 键 词: | 加味黄芪甘草汤 非小细胞肺癌 增殖 凋亡 侵袭 迁移 上皮间质转化 |
收稿时间: | 2022-06-08 |
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