基于Wnt/β-catenin通路探讨加味黄芪甘草汤对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的 探究加味黄芪甘草汤冻干粉对人非小细胞肺癌细胞A549、PC9增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响及可能的机制。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测1.0，2.0，4.0，8.0，12.0 g·L^-1加味黄芪甘草汤冻干粉对非小细胞肺癌细胞增殖的影响；将A549、PC9细胞分为空白组和加味黄芪甘草汤低、中、高组（2.0，4.0，8.0 g·L^-1）；平板克隆检测加味黄芪甘草汤对细胞克隆能力的影响；Hoechst 33342染色检测加味黄芪甘草汤对细胞凋亡的影响；划痕实验和Transwell小室实验分别检测其迁移与侵袭能力；微球体形成实验观察加味黄芪甘草汤对肿瘤细胞成球能力的影响，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测多能干细胞维持基因八聚体转录因子（Oct-4）、人性别决定区y框蛋白2（Sox2）、同源盒转录因子（Nanog）的mRNA表达水平，评估肿瘤干细胞活性；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2），Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白（Bad），Bcl-2相关X蛋白（Bax），活化与非活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3、Caspase-3），E-钙黏连蛋白（E-cadherin），N型钙黏蛋白（N-cadherin），波形蛋白（Vimentin），基质金属蛋白酶-2（MMP-2），β-连环蛋白（β-catenin），c-核蛋白类基因（c-Myc），细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁），锌指转录因子（Slug）蛋白表达水平。结果 与空白组比较，A549、PC9细胞经1.0，2.0，4.0，8.0，12.0 g·L^-1加味黄芪甘草汤冻干粉处理24 、48 h，细胞增殖能力均被明显抑制，并呈浓度与时间依赖性（P<0.05，P<0.01）；加味黄芪甘草汤低、中、高组均能抑制A549、PC9细胞的克隆能力（P<0.05，P<0.01）；加味黄芪甘草汤高组均能诱导A549、PC9细胞凋亡（P<0.01）；加味黄芪甘草汤低、中、高组均能抑制A549、PC9细胞侵袭、迁移能力（P<0.05，P<0.01）；经加味黄芪甘草汤低、中、高组处理后，A549细胞的微球体体积明显缩小，A549、PC9细胞Oct-4、Sox2和Nanog mRNA表达量均降低（P<0.05，P<0.01）；加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P<0.05，P<0.01），上调促凋亡蛋白Bad、Bax及cleaved Caspase-3/Caspase-3的表达（P<0.05，P<0.01）；加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞MMP-2、N-cadherin及Vimentin的表达（P<0.05，P< 0.01），上调E-cadherin的表达（P<0.05，P<0.01）；加味黄芪甘草汤中、高组均能下调A549、PC9细胞β-catenin、c-Myc、Cyclin D₁及Slug表达（P<0.01）。结论 加味黄芪甘草汤可抑制人非小细胞肺癌A549、PC9细胞的增殖、侵袭、迁移、肿瘤干细胞活性及上皮间质转化，并能诱导凋亡，作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。