基于p38 MAPK通路探讨乌丹丸对子宫内膜异位症寒凝血瘀证巨噬细胞极化的影响

目的 基于p38丝裂素活化蛋白激酶（p38 MAPK）探讨乌丹丸对子宫内膜异位症（EMT）寒凝血瘀证模型大鼠巨噬细胞M1/M2极化的影响。方法 选取雌性SD大鼠，随机数字法分为假手术组、模型组、乌丹丸高、中、低剂量组（2.4、1.2、0.6 g·kg^-1）、中成药组和西药组，采用冰水浴联合自体子宫内膜移植法建立子宫内膜异位症寒凝血瘀证大鼠模型，连续给药4周处死取材。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-4、转化生长因子-β（TGF-β）炎性因子的表达评估炎症；其次，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测一氧化氮合成酶（iNOS）、TNF-α、精氨酸酶1（Arg1）、甘露糖受体（CD206）转录水平评价巨噬细胞极化；蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫荧光技术（IF）检测iNOS、Arg1蛋白的表达佐证巨噬细胞极化。Western blot和Real-time PCR检测p38 MAPK信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组血清TNF-α，IL-1β、TGF-β，IL-4含量均明显升高（P<0.05），异位内膜组织中iNOS、TNF-α、p-p38 MAPK、酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白明显升高，iNOS、TNF-α、MAPK、ERK mRNA水平明显升高，Arg1、CD206 mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），异位内膜组织iNOS阳性细胞数明显升高，Arg1阳性细胞数明显（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，各给药组TNF-α，IL-1β、TGF-β，IL-4表达量均有不同程度降低，乌丹丸高、中剂量组和西药组尤为明显（P<0.05），乌丹丸高、中剂量组及中成药、西药组大鼠异位子宫内膜组织中iNOS、TNF-α、p-p38 MAPK、p-ERK蛋白明显降低，iNOS、TNF-α、MAPK、ERK mRNA水平明显降低，Arg1、CD206 mRNA及蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01），乌丹丸高、中剂量组及中成药、西药组大鼠异位内膜组织中iNOS细胞阳性数量明显降低，Arg1蛋白阳性数明显升高（P<0.05，P<0.01），乌丹丸低、中、高剂量呈剂量依赖性，高剂量组与西药组疗效相近。结论 乌丹丸可以降低子宫内膜异位症寒凝血瘀证大鼠模型的炎性反应，减少TNF-α、IL-1β、IL-4、TGF-β炎性因子的表达，促使巨噬细胞从M1型向M2型极化，其机制可能与p38 MAPK信号通路相关。

Effect of Wudan Pill on Polarization of Macrophages in Endometriosis with Cold Congeal and Blood Stasis Syndrome Based on p38 MAPK Pathway