新加达原散联合亚胺培南西司他丁对临床分离多重耐药大肠埃希菌生物膜的影响

目的 通过实验筛选出产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）且成膜能力最强的大肠埃希菌，探讨新加达原散（MDYS）联合亚胺培南西司他丁（IPM）对其生物膜状态下的干预作用。方法 通过纸片扩散、结晶紫染色法鉴定临床分离的19株耐药大肠埃希菌产酶及生物被膜的形成能力情况，筛出产酶且成膜能力最强大肠埃希菌。通过噻唑蓝（MTT）比色法检测MDYS组和IPM组最低抑菌浓度后，四唑鎓盐（XTT）比色法检测1/2、1/4、1/8 MDYS水提取物最低抑菌浓度（MIC）与1/2、1/4、1/8 IPM MIC单独及联合用药效果筛选最佳用药浓度，BioFlux动态观察所选取最佳联合用药浓度对大肠埃希菌生物膜内细菌数量及生物膜形成的影响，并用激光共聚焦扫描显微镜观察活菌/死菌的分布。最后通过扫描电镜静态观察药物治疗后细菌的形态学变化。结果 E5E7菌株为产ESBL且成膜能力最强大肠埃希菌。MTT比色法检测结果显示，IPM、MDYS水提物对E5E7菌株的MIC值分别为1 mg·L^-1、250 g·L^-1，XTT比色法检测结果显示，与空白组比较，1/2、1/4、1/8 MDYS水提物MIC及联合用药组可显著减少生物膜活菌量（P<0.01），随IPM浓度减小，抑制作用减弱。与单用相同浓度的IPM组比较，联合用药组协同抑制生物膜活菌量显著增强（P<0.01）。与单用相同浓度的MDYS组比较，1/2 IPM MIC联合1/2、1/4、1/8 MDYS MIC，1/4 IPM MIC联合1/2、1/4 MIC MDYS，1/8 IPM MIC联合1/2、1/4 MDYS MIC活菌量明显降低（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，1/8 IPM MIC、1/2 IPM MIC对细菌解聚解黏附作用不明显。当使用1/2、1/4 MDYS水提取物MIC时膜面积明显减小。在IPM与MDYS联合用药时，与空白组或者单用IPM组比较，膜面积变小。共聚焦结果显示，空白组活菌生力旺盛。IPM与MDYS联合用药及MDYS单独使用时可以观察到细菌大多呈红色染色，细菌代谢能力弱，为死菌；在1/2、1/8 IPM MIC时，可观察到代谢活性较强的浮游菌。扫描电镜下结果显示，与空白组和IPM组比较，IPM和MDYS联合用药作用下，分裂周期明显长于空白组，且联合用药组分裂期长度高于单独用药组。结论 体外研究揭示了MDYS联合常用抗生素对多重耐药大肠埃希菌生物膜状态具有抑制作用，MDYS具有增敏和协同抗生素抑菌的作用。

Effect of Modified Dayuansan Combined with Imipenem-cilastatin on Biofilm of Clinically Isolated Multidrug-resistant Escherichia coli