毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的 探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白130（GP130）/Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响。方法 原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并利用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）进行鉴定。分别加入5、10、20 μmol·L^-1毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h,然后加入100 μmol·L^-1过氧化氢（H₂O₂）处理24 h造成氧化损伤模型,细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖情况选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分为空白组、模型组（H₂O₂ 100 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+LY294002组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+LY294002 10 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+Stattic组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+Stattic 3 μmol·L^-1）。CCK-8法、免疫荧光检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B（Akt）、GP130、白细胞介素-6（IL-6）的蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组细胞的增殖活力明显降低,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;与模型组比较,毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组细胞的增殖活力明显增加,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）;与毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组比较,PI3K抑制剂LY294002和STAT3抑制剂Stattic均能明显降低细胞的增殖活力,增加细胞凋亡率（P<0.05）。与空白组比较,模型组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平明显增加（P<0.05）;与模型组比较,各用药组p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论 毛蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡,并能通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。

Effect of Calycosin-mediated GP130/JAK/STAT Signaling Pathway on Oxidative Injury of Astrocytes in Spinal Cord