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仙连解毒方干预“湿热瘀毒证”小鼠结直肠肿瘤的转录组学分析
引用本文:陈桐庆,余成涛,许惠琴,程海波,沈卫星,谭佳妮,徐长亮,赖岳阳,范旻旻.仙连解毒方干预“湿热瘀毒证”小鼠结直肠肿瘤的转录组学分析[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(8):63-71.
作者姓名:陈桐庆  余成涛  许惠琴  程海波  沈卫星  谭佳妮  徐长亮  赖岳阳  范旻旻
作者单位:1.江苏省中医药防治肿瘤协同创新中心,南京 210023;2.南京中医药大学 第一临床医学院,南京 210023;3.南京中医药大学 医学院·整合医学院,南京 210023
基金项目:国家自然科学基金重点项目(81930117);江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD);江苏省自然科学基金青年项目(BK20190236);张家港市卫健委青年科技项目(ZJGQNKJ201902)
摘    要:目的 通过转录组测序技术(RNA-seq)分析仙连解毒方干预“湿热瘀毒证”小鼠结直肠肿瘤的转录组学特征。方法 将90只C57BL/6(雄性)小鼠随机分为正常组、“湿热瘀毒证”结直肠肿瘤模型组及仙连解毒方组,每组30只。模型组和仙连解毒方组予以高脂饲料喂养,以经典氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)方式构建结直肠癌模型,仙连解毒方组从造模当天开始给药(12.9 g·kg-1),共给药112 d。末次给药结束4 h后,取各组小鼠结直肠组织,苏木素-伊红(HE)染色和亚甲基蓝染色观察小鼠结直肠的组织病理形态;提取结直肠组织总RNA,采用RNA-seq技术进行转录组学测序,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并筛选、验证差异基因。结果 与模型组比较,仙连解毒方可显著改善小鼠结直肠充血水肿情况,减少小鼠结直肠肿瘤数量、体积;亚甲基蓝染色结果表明仙连解毒方可以显著抑制畸形隐窝灶(ACF)的发生(P<0.01);HE染色显示仙连解毒方可显著减轻结直肠组织的损伤、异型增生;RNA-seq测序结果显示,模型组与正常组差异表达的基因共615个,上调基因446个,下调基因169个。仙连解毒方组与模型组差异表达的基因共54个,上调基因29个,下调基因25个。RNA-seq测序分析发现仙连解毒方主要调控NIMA相关蛋白激酶7(Nek7,P<0.01),黏蛋白16(Muc16,P<0.01),SiahE3泛素蛋白连接酶家族成员3(Siah3,P<0.01),胰岛再生基因3g(Reg3g,P<0.01),RNA聚合酶2延长因子相关因子2(Eaf2,P<0.01),转化生长因子-α(TGF-αP<0.05),分泌珠蛋白家族1A成员1(Scgb1a1,P<0.05),序列相似家族227成员B(Fam227B,P<0.05),细胞色素P450家族2亚家族c多肽40(Cyp2c40,P<0.01),锚蛋白重复及EF手结构域蛋白1(Ankef1,P<0.05)等基因的表达,并且肠上皮细胞增殖等生物过程、细胞色素P450酶对外源性药物的代谢作用,花生四烯酸代谢等信号通路被显著富集。结论 仙连解毒方具有干预“湿热瘀毒证”小鼠结直肠肿瘤发生、发展的作用,转录组学分析提示可能与干预代谢相关通路密切相关。

关 键 词:转录组学  仙连解毒方  结直肠肿瘤  细胞代谢
收稿时间:2021/8/17 0:00:00
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