半胱氨酸蛋白酶抑制剂 Ｃ 重组蛋白的制备

摘要：目的 构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂 Ｃ（ＣｙｓＣ）原核表达载体，用以快速获取低成本、高浓度、高纯度的 ＣｙｓＣ 纯化蛋白，为制备应用于临床实验室检测的 ＣｙｓＣ 标准物质和质控品奠定基础。 方法 用 Ｃｏｄｏｎ Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ Ｔｏｏｌ 将人的 ＣｙｓＣ 编码序列优化为大肠杆菌偏好的密码子序列，再将合成的 ＤＮＡ 片段克隆至 ｐＥＴ?２８ａ（＋）原核表达载体。 将重组 ＣｙｓＣ 表达质粒转化至Ｅ． ｃｏｌｉＢＬ２１ 感受态中，优化诱导表达条件、确定最优表达条件组合及有效表达序列，并用融合标签对重组蛋白进行纯化。 结果 成功构建重组 ＣｙｓＣ 原核表达质粒，明确 ＣｙｓＣ 表达序列，确定异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导重组蛋白表达浓度、诱导温度等条件，纯化的 ＣｙｓＣ 蛋白可通过临床检测，且稀释倍数与检测浓度间呈现线性关系。 结论 成功构建重组 ＣｙｓＣ 的高效原核表达系统，重组 ＣｙｓＣ 蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有望为 ＣｙｓＣ 标准物质和质控品的制备提供物质基础。

Preparation of cystatin C recombinant protein