南蛇藤提取物通过破坏线粒体结构促进胃癌AGS细胞凋亡的机制

目的 观察南蛇藤提取物（COE）对胃癌细胞的抑制作用，探讨COE通过影响线粒体结构和功能促进胃癌凋亡的一种全新的作用机制，为南蛇藤的进一步开发和临床应用提供实验依据。方法 5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）染色联合流式细胞实验用来检测不同质量浓度COE （20、40、80 mg·L^-1）对胃癌细胞增殖的影响。通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）染色实验联合流式细胞术检测COE对胃癌细胞凋亡的影响，用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位的变化，通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测COE对胃癌细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-xL（Bcl-xL）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶-3（Caspase-3）表达的影响，用透射电镜检测COE处理后的胃癌细胞线粒体微观结构的变化，包括线粒体膜完整性和内部嵴的变化。COE处理后，Western blot检测胃癌细胞线粒体标志蛋白超氧化物歧化酶1（SOD1）、电压依赖性阴离子通道蛋白（VDAC）、抗增殖蛋白1（PHB1）和热休克蛋白60（HSP60）水平的变化。结果 Brdu染色显示，与空白组比较，COE组（40、80 mg·L^-1）胃癌细胞的增殖比例明显下降（P<0.05）。AnnexinV-FITC染色显示，与空白组比较，COE组（40、80 mg·L^-1）胃癌细胞的凋亡数量明显增加（P<0.05）。JC-1线粒体膜电位检测显示，COE处理后组胃癌细胞的线粒体膜电位水平明显降低。Western blot结果显示，与空白组比较，COE组（20、40、80 mg·L^-1）促进胃癌凋亡的相关蛋白Bax和Caspase-3表达明显增加（P<0.05，P<0.01），COE组（40、80 mg·L^-1）胃癌细胞凋亡抵抗相关蛋白Bcl-2和Bcl-xL表达显著降低（P<0.01）。透射电镜结果显示，与空白组比较，COE组胃癌细胞的微观结构发生了明显变化，细胞膜内出现了很多空泡，线粒体结构出现破坏，线粒体内出现空泡。Western blot结果显示，与空白组比较，COE组（20、40、80 mg·L^-1）胃癌细胞中与应激反应有关的蛋白SOD1表达增高（P<0.05，P<0.01），COE组（80 mg·L^-1）与线粒体稳定和通透性相关的蛋白VDAC、PHB1和HSP60表达均显著下降（P<0.01）。结论 COE能够显著抑制胃癌细胞的增殖，促进胃癌细胞的凋亡，其机制可能与COE破坏胃癌细胞线粒体结构和功能从而激活细胞线粒体凋亡途径有关。

Celastrus orbiculatus Extract Promotes Apoptosis of Gastric Cancer Cells by Destroying Mitochondrial Structure