| 摘 要： | 目的研究miR-25在高糖条件下人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞中表达情况,及下调miR-25对ARPE-19细胞中Smad7和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养ARPE-19细胞,采用葡萄糖(30 mmol/L)处理细胞模拟高糖状态,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-25表达水平;采用Lipofectamine TM3000试剂盒进行转染,将ARPE-19细胞分为miR-25低表达(antagomir)组、阴性对照(NC)组、高糖(HG)组及正常葡萄糖(NG)组。转染后48 h,光学显微镜观察细胞形态,CKK-8法检测细胞增殖情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ARPE-19细胞E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)mRNA表达;蛋白免疫印记(WB)检测E-cad、α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF、Smad7蛋白表达情况。结果与NG组比较,HG组ARPE-1细胞miR-25表达显著升高,差异有统计学意义(P0.05);转染miR-25 antagomir后,与HG组和NC组比较,ARPE-19细胞miR-25表达显著下调(P0.05)。与NG组比较,HG组、NC组ARPE-19细胞变长呈纺锤形细胞,细胞中α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF表达上调(P0.05),E-cad、Smad7表达下调(P0.05);与HG组、NC组比较,antagomir组纺锤形ARPE-19细胞数量减少,细胞中α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF表达下调(P0.05),E-cad、Smad7表达上调(P0.05)。结论高糖条件下,下调miR-25可抑制VEGF表达,促进Smad7表达,抑制人视网膜色素上皮细胞纤维化。
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