小鼠胃幽门部类器官长时期培养模型的建立和形态分析

目的探讨建立基于干细胞的小鼠胃幽门部类器官体外长期培养体系的方法,分析实验操作中的注意事项,为促进胃发育、生理、感染和肿瘤发生等研究提供理想的实验模型。方法培养和收集R-Spondin1、Wnt-3A条件培养基,按生长因子比例制备类器官培养基。处死C57BL/6小鼠,分离胃幽门部,彻底清洗、消化并收集胃腺体。基质胶包埋后加入类器官培养基,显微镜下观察类器官生长状况。收集生长时间为1个月和5个月的类器官,制成石蜡标本,行HE和Ki67免疫组织化学染色,比较两个时间点的类器官形态和增殖能力。结果在基质胶和类器官培养基的作用下,胃幽门部类器官能长期持续培养达7个月以上。组织形态上,生长时间为1个月和5个月的类器官均显示由单层柱状上皮构成。Ki67阳性细胞数前者稍高,但后者仍具一定的生长增殖能力。结论成功建立了小鼠胃幽门部类器官体外长期培养体系,建立了类器官的石蜡样本处理方法并优化步骤,提供了具广泛应用前景的新兴的实验模型。