miR-147a通过抑制CCND1和CDK4的表达对膀胱癌细胞周期和增殖的影响

目的:探讨miR-147a在膀胱癌组织、细胞中的表达及对膀胱癌细胞增殖和细胞周期的影响，研究miR-147a靶向负性调控CCND1和CDK4的表达对膀胱癌细胞周期和增殖的影响。方法:通过qRT-PCR检测miR-147a在正常膀胱组织和膀胱癌组织及正常膀胱上皮细胞、膀胱癌细胞系中的表达；使用miR-147a mimics转染观察细胞特性变化；CCK-8检测方法观察细胞增殖能力变化；流式细胞术观察细胞周期变化；生物信息学方法分析miR-147a的靶基因，并将靶基因进行GO分类和KEGG分析，找到与增殖和周期相关的基因；通过western blot方法验证miR-147a的靶基因，使用双萤光素酶报告基因系统检测miR-147a对CCND1和CDK4的转录活性影响；使用CCND1和CDK4特异性siRNA观察它们对细胞周期的影响，使用miR-147a inhibitor进行回补实验。结果:同正常组织/细胞相比，miR-147a在膀胱癌组织/膀胱癌细胞系中表达水平显著降低（P＜0.05），miR-147a能够使膀胱癌细胞发生G1/S期阻滞，细胞增殖能力降低；通过一系列生信分析找到两个与细胞增殖和周期相关的miR-147a的靶基因CCND1和CDK4；通过间接和直接实验验证CCND1和CDK4是miR-147a的靶基因；下调CCND1和CDK4能够使膀胱癌细胞发生G1/S期阻滞，同时抑制miR-147a的表达能够解除G1/S期阻滞。结论:miR-147a作为一个抑癌因子，可作为诊断膀胱癌的生物标志物；miR-147a通过抑制CCND1和CDK4的表达抑制膀胱癌细胞周期G1/S期进程并抑制膀胱癌细胞增殖。

Effect of miR-147a on the cell cycle and proliferation of bladder cancer cells by inhibiting the expression of CCND1 and CDK4