基于转录组测序的EV71感染RD细胞的基因表达变化研究

目的　基于转录组测序技术探讨肠道病毒71型（EV71）感染对人横纹肌肉瘤（RD）细胞自噬和免疫的影响及其作用机制。方法　用不同剂量EV71感染RD细胞确定感染复数（MOI）。在MOI=1时选择不同时间点（0、0.5、1、1.5、3、6、9和12 h）共8组进行后续实验。倒置显微镜观察细胞形态和数量变化；蛋白免疫印迹（Western blot）检测蛋白表达情况；运用转录组测序技术分析细胞功能及基因表达的变化；高内涵细胞成像技术观察细胞内蛋白表达情况。结果　倒置显微镜可见细胞在病毒感染3 h由梭形贴壁逐渐变为圆形悬浮，细胞数量相比0 h明显减少（P＜0.05）。Western blot结果显示细胞在感染后6 h、9 h、12 h，病毒在RD细胞内已经表达病毒衣壳蛋白1（VP-1），感染后9 h自噬相关蛋白LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ与0 h组相比明显升高（P＜0.01）。转录组测序结果显示EV71感染RD细胞后3 h细胞内基因表达变化达到峰值，上调基因1 199个，下调基因126个。KEGG分析提示改变的信号通路分子大多与自噬和免疫相关。高内涵细胞成像显示细胞在感染后数量减少，细胞内自噬蛋白平均荧光强度增加（P＜0.05）。结论　EV71感染RD细胞通过自噬相关信号通路促进病毒在细胞内完成复制和组装。