抑制 BHK21细胞 STYK1/NOK基因的转录组分析 #br# |
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引用本文: | 高婧雅,张骊,谢炎,郭庆军,田大治,李俊杰,蒋文涛,刘力.抑制 BHK21细胞 STYK1/NOK基因的转录组分析 #br#[J].天津医药,2020,48(4):241-247. |
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作者姓名: | 高婧雅 张骊 谢炎 郭庆军 田大治 李俊杰 蒋文涛 刘力 |
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作者单位: | 1天津医科大学一中心临床学院(邮编 300192);2天津市第一中心医院移植外科;3北京协和医学院中国医学科学院基础医学研究所微生物系 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(81870444);天津市科技计划项目(17ZXMFSY00040);天津市自然科学基金(19JCQNJC10300);天
津市第一中心医院科技基金(CL201801);中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2017-I2M-3-007) |
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摘 要: | 目的 转录组分析抑制丝氨酸-苏氨酸-酪氨酸激酶 1(STYK1/NOK)后仓鼠肾正常细胞 BHK21的基因表
达,并分析其可能作用的信号通路。方法 BHK21细胞分为空载体组(转染 6 µg空载体 pBs/U6)、低转染浓度组(2
µg si-STYK1/NOK质粒+4 µg空载体 pBs/U6)和高转染浓度组(6 µg si-STYK1/NOK质粒)。转染 48 h后,Western blot
检测 STYK1/NOK蛋白表达,基于检测结果,选取空载体组和高转染浓度组提取总 RNA进行转录组测序。将测序所
得的序列进行过滤比对,获得差异表达基因后,应用 R软件进行生物功能(GO)分析和 KEGG信号通路分析。应用
STRING蛋白质互作数据库中的互作关系进行差异基因蛋白互作网络的分析。采用 qRT-PCR验证关键差异表达基
因亚甲基四氢叶酸脱氢酶 2(Mthfd2)、转录激活因子 5(Atf5),ⅡA分泌型磷脂酶 A2(Pla2g2a)、6-磷酸果糖-2-激酶/
果糖-2,6-双磷酸酶 3(Pfkfb3)的表达。CCK-8法检测空载体组和高转染浓度组细胞增殖情况。结果 Western blot
结果表明高转染浓度组明显抑制 STYK1/NOK蛋白表达。高转染浓度组与空载体组相比,共发现差异表达基因 44
个,包括 19个上调基因和 25个下调基因。GO富集分析发现差异表达基因主要影响生物调控、细胞进程、代谢调控、
细胞生物过程、细胞、细胞部分、胞外区、配体和催化活性。KEGG通路分析发现差异表达基因主要集中作用于免疫
系统、癌症、细胞周期、信号转导和氨基酸代谢等方面。qRT-PCR结果表明,高转染浓度组Mthfd2、Atf5的相对表达量
显著上调(P<0.05),Pfkfb3、Pla2g2a的相对表达量显著下调(P<0.05),与测序结果相一致。细胞增殖实验表明高转
染浓度组细胞增殖明显高于空载体组(P<0.01)。结论 抑制 BHK21细胞 STYK1/NOK表达后,致使 BHK21细胞原
癌基因表达增强,抑癌基因表达减少,促进细胞增殖。
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收稿时间: | 2019-12-19 |
修稿时间: | 2020-03-05 |
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