Wnt信号通路转录上调EGFR促进非小细胞肺癌吉非替尼耐药

目的 探讨Wnt信号通路和表皮生长因子受体（EGFR）在非小细胞肺癌（NSCLC）吉非替尼耐药中的作用及其机制。方法 运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹实验（Western blot）检测EGFR在亲代HCC827细胞与吉非替尼耐药细胞（HCC827/R）中的表达；免疫组化染色检测耐药前后3对NSCLC肿瘤组织中EGFR的表达。双荧光素酶报告基因实验（Luciferase）检测亲代 HCC827 细胞与耐药 HCC827/R 细胞 Wnt 信号通路活化情况；在Jaspar数据库中预测EGFR基因启动子区上TCF/LEF转录因子结合位点；染色质免疫共沉淀实验（Chip）和Luciferase实验检测转录因子对基因表达的调控；功能阻断实验检测Wnt信号通路/EGFR途径介导吉非替尼耐药的作用。结果 与亲代HCC827细胞相比较，HCC827/R细胞的EGFR在mRNA和蛋白水平表达均明显增高（P＜0.05）。免疫组化染色结果显示在 3 例吉非替尼耐药前后 NSCLC 配对肿瘤组织样品中有 2 例耐药后 EGFR 表达较耐药前增加。Luciferase实验结果显示，与亲代细胞比较，Wnt/β-catenin信号通路在耐药HCC827/R细胞中异常活化（P＜0.05）。生物信息学分析预测到EGFR基因启动子区-1476~-1468区域存在Wnt/β-catenin信号通路下游转录因子TCF3/TCF4结合位点，Chip和Luciferase实验证实Wnt/β-catenin信号通路可转录上调EGFR表达。功能阻断实验结果显示当利用Wnt3a刺激亲代HCC827细胞的同时敲低EGFR，吉非替尼对细胞的抑制率较单独利用Wnt3a刺激细胞时的细胞抑制率得到恢复（P＜0.05）。结论 Wnt/β-catenin信号通路转录上调EGFR促进NSCLC的吉非替尼耐药，其为提高NSCLC吉非替尼靶向治疗效果提供了新的实验依据。

Transcriptional upregulation of EGFR by Wnt signaling pathway topromote gefitinib resistance in non-small cell lung cancer