烟碱上调大鼠脑纹状体多巴胺D1受体mRNA表达诱导其行为改变

背景研究提示,烟碱对帕金森病小鼠具有神经保护效应,临床试验也观察到,帕金森病患者在吸烟过程中其震颤、僵直、运动减少等症状减轻,但其作用机制目前尚不明了.目的观察烟碱对大鼠脑纹状体多巴胺D1,D2受体mRNA表达的影响,分析烟碱对帕金森病神经保护效应的作用机制.设计完全随机分组设计,对照试验.单位中南大学湘雅医院神经病学研究所.材料选用健康雄性清洁级SD大鼠24只,10周龄,体质量180～200 g.主要试剂及仪器烟碱(美国Sigma公司)、反转录试剂盒(美国MBI公司)、聚合酶链反应热循环仪(美国Beckman)、全自动紫外分光光度计(美国Beckman Du-70)、图像分析处理系统(美国Stratagene Eagle Eye Ⅱ型).方法实验于2001-07/2002-07在中南大学湘雅医院神经病学研究所实验室完成.①按随机抽签法将大鼠随机分为2组对照组、烟碱组,每组12只.分别皮下注射生理盐水、烟碱溶液4 mg/(kg·d),2次/d,共14 d.注射药物后0.5 h观察大鼠行为活动,包括定型活动、走动活动、攀爬行为、旋转行为、理毛行为、张口行为、呕吐行为等,观察时间为0.5 h.②于末次注射药物后0.5 h处死动物,快速分离纹状体,提取总RNA,采用美国MBI反转录试剂盒反转录cDNA,在特定条件下进行聚合酶链反应扩增,将电泳凝胶在Eagle EyeⅡ图像处理系统上分析计算出多巴胺D1,D2受体及内对照β-actin吸光度(A值),检测大鼠脑纹状体多巴胺Di,D2受体mRNA的表达.③两样本均数比较采用t检验.主要观察指标①大鼠行为学改变.②大鼠脑纹状体多巴胺Di,D2受体mRNA的表达.结果大鼠24只均进入结果分析.①烟碱组大鼠于用药第3天,出现走动增多,易激惹,定型活动明显,并于第7～14天达到高峰;对照组则无明显变化.②大鼠脑纹状体所有标本总RNA A260/280均＞1.8,经12g/L琼脂糖浆电泳显示无明显降解;通过反转录聚合酶链反应和设定的引物,得到多巴胺Di,D2受体及actin的扩增产物分别为350 bp,399 bp,218 bp,与预计值一致.③在大鼠纹状体内,烟碱组多巴胺D1受体mRNA表达比对照组上升23%(分别为98.63±1.13,65.29±1.45,P＜0.01),两组多巴胺D2受体mRNA的表达差异无显著性意义(P＞0.01).结论烟碱可能通过上调大鼠纹状体多巴胺D1受体mRNA的表达而诱导大鼠行为改变.

Chronic nicotine induces the changes of locomotor activities in rats by increasing the mRNA levels of dopamine D1 receptor in striatum