刺五加多糖对自身免疫性肝炎小鼠肝损伤的改善作用及机制研究

目的]研究刺五加多糖(Acanthopanax senticosus polysaccharide,ASPS)对自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠肝损伤的改善作用,并探讨相关分子机制。方法]从120只C57BL/6小鼠中选取60只用于免疫剂的制备,其余50只腹腔注射免疫剂,建立AIH模型。将42只建模成功的小鼠随机分为AIH组(10只)、ASPS低剂量组(10只)、ASPS高剂量组(11只)和泼尼松龙组(11只),其余10只小鼠不进行处理,设为健康组。ASPS低、高剂量组分别采用50、100mg·kg-1的ASPS灌胃,泼尼松龙组采用9mg·kg-1泼尼松龙灌胃,健康组与AIH组均以等量0.9%氯化钠溶液灌胃。检测各组小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、白介素-22(interleukin-22,IL-22)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;以多参数流式细胞术检测外周血辅助性T细胞22(Thelper cell 22,Th22)的比例;以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肝组织病理变化;Western blot检测肝组织Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)、磷酸化核因子-κB(phosphorylation-nuclear factor-κB,p-NF-κB)蛋白相对表达量。结果]与健康组比较,AIH组血清AST、ALT、IL-22、TNF-α、IL-6水平,外周血CD4+T淋巴细胞中Th22细胞比例均升高(P0.05);与AIH组比较,ASPS低、高剂量组和泼尼松龙组血清AST、ALT、IL-22、TNF-α、IL-6水平,外周血CD4+T淋巴细胞中Th22细胞比例均降低(P0.05);与ASPS低剂量组比较,ASPS高剂量组和泼尼松龙组血清AST、ALT、IL-22、TNF-α、IL-6水平,外周血CD4+T淋巴细胞中Th22细胞比例均降低(P0.05)。HE染色结果显示,AIH组肝细胞明显水肿,肝小叶结构被破坏,可观察到大面积小灶样坏死,且存在大量炎性细胞浸润;ASPS低、高剂量组和泼尼松龙组干预后,肝细胞小灶样坏死面积缩小,肝小叶结构较为完整,炎性细胞浸润减少。与健康组比较,AIH组肝组织TLR4、MyD88蛋白相对表达量,p-NF-κB p65/NF-κB p65均升高(P0.05);与AIH组比较,ASPS低、高剂量组和泼尼松龙组肝组织TLR4、MyD88蛋白相对表达量,p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P0.05);与ASPS低剂量组比较,ASPS高剂量组、泼尼松龙组肝组织TLR4、MyD88蛋白相对表达量,p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P0.05)。结论]ASPS可保护AIH小鼠肝功能,调节Th22细胞比例,减轻炎症反应,缓解肝组织病理变化,且呈剂量依赖性,其分子机制可能与抑制TLR4/MyD88信号通路有关。

Effect of Acanthopanax Senticosus Polysaccharide on Liver Injury in Mice with Autoimmune Hepatitis and Its Mechanism