健脾解毒方对结直肠癌细胞RUNX2及其下游ITGBL1表达的影响

  目的：探讨健脾解毒方对β-catenin通路下游Runt相关转录因子2(RUNX2)和整合素β样因子1(ITGBL1)表达的影响,进一步揭示其抑制结直肠癌侵袭转移的作用机制。  方法：①将LoVo细胞分为健脾解毒方不同浓度(0、50、100、200 μg/ml)组,各组分别予以相应浓度的醇提物溶液。干预48 h后,PCR检测RUNX2、ITGBL1的mRNA表达,Western blot检测RUNX2、ITGBL1的蛋白表达。②构建慢病毒载体介导的RUNX2基因沉默LoVo细胞。将转染细胞分为对照组(shRNA/NC)、健脾解毒方(中药)组(shRNA/NC+200 μg/ml健脾解毒方醇提物)、RUNX2基因沉默组(shRNA/RUNX2)、RUNX2基因沉默+中药组(shRNA/RUNX2+200 μg/ml健脾解毒方醇提物),各组分别予以相应药物干预。细胞培养48 h后,Transwell实验观察细胞迁移情况,PCR检测ITGBL1的mRNA表达,Western blot检测ITGBL1的蛋白表达。  结果：①健脾解毒方能够明显抑制β-catenin信号通路下游分子RUNX2、ITGBL1的mRNA和蛋白表达,且呈一定的剂量依赖性。②RUNX2基因沉默可抑制LoVo细胞迁移,与对照组相比,迁移细胞数和ITGBL1表达显著降低(P＜0.01)。但RUNX2基因沉默+健脾解毒方组与RUNX2基因沉默组比较,迁移细胞数和ITGBL1表达无明显差异(P>0.05)。  结论：RUNX2是健脾解毒方抑制结直肠癌细胞转移的关键靶点,健脾解毒方通过抑制RUNX2,下调ITGBL1表达,进而发挥抗结直肠癌侵袭转移的作用。