微小RNA-24对骨肉瘤细胞U2OS体外增殖与迁移能力的影响及作用机制

目的 探讨微小RNA-24(miR-24)对人骨肉瘤细胞株U2OS体外增殖与迁移能力的影响及其可能的机制.方法 通过转染miR-24模拟物(miR-24 mimic)建立miR-24过表达的U2OS细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、细胞活力检测方法(CCK-8法)和Transwell检测对照组、阴性对照组和miR-24过表达组3组细胞增殖及迁移能力的变化;Western blotting检测细胞的上皮间质转化(EMT)进程及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的活性.结果 对照组、阴性对照组和miR-24过表达组miR-24的表达水平分别为1.00±0.00、1.03±0.08和2.46±0.29,3组间差异有统计学意义(F=11.026,P=0.012),转染了miR-24 mimic后,人骨肉瘤细胞株U2OS中的miR-24表达水平与对照组相比显著升高(t=4.604,P=0.009).与对照组相比,人骨肉瘤细胞株U2OS过表达miR-24 24 h[(3.56±0.27)%∶(8.63±0.79)%]、48 h[(20.16±1.09)%∶(54.77±5.42)%)]和72 h[(45.47±3.16)%∶(95.52±8.56)%]后细胞增长率均明显降低,差异均有统计学意义(t=3.896,P=0.016;t=4.813,P=0.008;t=7.173,P=0.002).过表达miR-24 24 h后,对照组、阴性对照组和miR-24过表达组细胞相对迁移率分别为(100.00±0.00)%、(99.26±5.85)%和(31.37±2.09)%,3组间差异有统计学意义(F=12.175,P=0.009);与对照组相比,过表达miR-24后细胞迁移率明显降低(t=3.843, P=0.014).同时过表达miR-24上调细胞中上皮细胞标志物上皮细胞钙黏蛋白(E-cadhe-rin,t=3.852,P=0.018)和β-连环素蛋白(β-catenin)的表达(t=3.512,P=0.024),而下调间质细胞标志物神经钙黏蛋白(N-cadherin,t=3.832,P=0.018)和波形蛋白(vimentin)的表达(t=4.058,P=0.012),抑制U2OS的EMT进程.此外,过表达miR-24可下调NF-κB(p65)(t=4.813,P=0.008)、磷酸化核因子IκB激酶抑制剂α(p-IKK-α)(t=3.764,P=0.013)和磷酸化激活IκB激酶复合物α(p-IκB-α)的表达(t=4.064,P=0.012),抑制NF-κB信号通路的激活.结论 miR-24可抑制人骨肉瘤细胞株U2OS体外增殖与迁移,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活,进而抑制细胞的EMT进程相关.提示miR-24可作为治疗骨肉瘤迁移的一个潜在作用位点.

Effect and mechanism of microRNA-24 on cell proliferation and migration of osteosarcoma cell line U2OS