p16β基因重组腺病毒质粒的构建及对喉癌细胞的作用

目的探讨野生型p16β对体外喉癌Hep-2细胞周期信号传导的干预作用。方法以重组腺病毒为载体，构建p16β的重组腺病毒AdEasy-GFP-p16β质粒，并在293细胞中包装、纯化。将已纯化的重组腺病毒AdEasy-GFP-p16β在体外转染Hep-2喉癌细胞，采用MTT实验、流式细胞术（FCM）、免疫组化、Western blot等实验手段检测Hep-2细胞的抑制／杀伤作用及其细胞周期信号、DNA含量、细胞凋亡率的变化；检测P16蛋白的表达和Hep-2细胞的超微结构变化。结果本研究成功地构建和制备了高滴度的AdEasy-GFP-p16β重组腺病毒，并高效地转移到Hep-2细胞内和表达P16蛋白，有效地抑制了Hep-2细胞的生长。被转染的Hep-2细胞被有效地阻滞在G0／G1期，提高了转染细胞的凋亡率。结论重组腺病毒AdEasy-GFP-p16β能高效感染Hep-2细胞，表达P16蛋白；有效抑制Hep-2细胞增殖；干预Hep-2细胞周期的信号传导机制和细胞周期，诱导凋亡，从而抑制肿瘤细胞增殖活性。