乙型肝炎病毒X蛋白截短突变体的构建及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响

 目的：观察乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）截短突变体在细胞内的定位及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响。方法：采用PCR克隆全长野生型HBx基因，在此基础上，分别构建融合增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因和缺失HBx基因C端49~154 aa、C端85~154 aa、N端1~57 aa + C端141~154 aa、N端1~57 aa或N端1~84 aa截短突变体的表达载体；激光共聚焦显微镜下观察HBx截短突变体在HEK293细胞中的定位；采用萤光素酶报告系统检测HBx截短突变体对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响。结果：（1）成功构建了HBx截短突变体与EGFP基因融合的表达载体。（2）野生型HBx及截短突变体在HEK293细胞中具有不同的定位，其中N端缺失突变体主要定位于细胞核周胞质；C端缺失突变体在胞质胞核中呈均匀分布；N端+C端缺失突变体的定位类似于野生型HBx，主要定位于胞质，呈不均一的粗大颗粒，胞核中也有少量表达。（3）与野生型HBx相比，HBx C端49~154 aa、C端85~154 aa、N端1~57 aa + C端141~154 aa、N端1~57 aa和N端1~84 aa缺失突变体在Huh7细胞中均使Wnt/β-catenin信号通路的转录活性明显下降，分别下降了78.7%、84.7%、75.7%、93.8%和95.5%。结论：HBx不同截短突变体的细胞定位及对Wnt/β-catenin信号通路转录活性不同，提示HBx的不同功能区对Wnt信号的转录激活发挥着不同的作用。