| 单细胞筛选全人源乙型肝炎病毒表面抗体可变区序列 |
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| 引用本文： | 唐亚华,蔡亮,罗芳贞,黄红林. 单细胞筛选全人源乙型肝炎病毒表面抗体可变区序列[J]. 实用预防医学, 2015, 22(7): 816-819 |
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| 作者姓名： | 唐亚华 蔡亮 罗芳贞 黄红林 |
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| 作者单位： | 1.南华大学药物药理研究所 湖南 衡阳 421001;2.湖南省疾病预防控制中心 湖南 长沙 410005 |
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| 摘 要： | 目的快速克隆全人源乙型肝炎病毒表面抗体可变区序列,为构建乙肝病毒表面抗体表达载体、筛选并制备治疗性全人源乙型肝炎单克隆抗体提供基础。方法20 μg乙肝疫苗（GSK公司）强化免疫1名乙肝表面抗体阳性的健康志愿者,7 d后,检测其乙肝表面抗体滴度大于1000 mIU/ml,采集30 ml肝素抗凝血,采用流式细胞仪分选出CD19+/CD27+/IgG+细胞群,挑选96 个单细胞,置于20 μl单细胞裂解液中。采用混合引物单细胞RT-PCR获得重链、轻链可变区序列,将PCR产物纯化后克隆至pMD®19-T载体,进行测序。对测序结果采用DNA Star 5.0 MegAlign和IgBLAST进行相似性和同源性分析。结果成功筛选出12 个阳性浆细胞,12个阳性细胞的轻链和重链PCR产物序列具有很高的同源性。结论成功筛选出单个浆细胞;获得了可能的HBsAb重链、轻链可变区序列,为后期开发乙肝治疗性抗体并建立一套快速制备抗原特异性全人源单克隆抗体的方法打下了坚实基础。
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| 关 键 词： | 单细胞 RT-PCR 乙型肝炎病毒表面抗体 单克隆抗体 |
Screening for the variable region sequence of hepatitis B virus surface antibody by single cell |
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| TANG Ya-hua,CAI Liang,LUO Fang-zhen,HUANG Hong-lin. Screening for the variable region sequence of hepatitis B virus surface antibody by single cell[J]. Practical Preventive Medicine, 2015, 22(7): 816-819 |
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| Authors: | TANG Ya-hua CAI Liang LUO Fang-zhen HUANG Hong-lin |
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| Affiliation: | 1 Institute of Pharmacy and Pharmacology, University of South China, Hunan, Hengyang, 421001, China;2 Hunan Center for Disease control and prevention,Hunan Changsha,410005,China |
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