实时荧光定量PCR快速检测创伤弧菌的研究

目的:建立一套在8 h内检测牡蛎中创伤弧菌的实时荧光定量PCR方法,并对其特异性、灵敏度和准确性等指标进行评价。方法:对经过或未经过3%NaCl碱性蛋白胨水5 h预增菌的样品分别采用两种DNA提取方法(QIAampDNA mini Kit和直接煮沸裂解法)提取DNA,并采用根据vvhA基因序列设计的引物和探针进行实时荧光定量PCR检测。结果:所建立的实时荧光定量PCR特异性强,仅对创伤弧菌呈阳性结果。对预增菌5 h后经QIAamp DNA mini Kit提取的DNA进行实时荧光定量PCR检测,其检测效果最佳,灵敏度达1.4 cfu/ml。结论:所建立的实时荧光定量PCR方法具有快速、特异性强、敏感高等特点,能在8h内完成在牡蛎等海产品中创伤弧菌的快速检测。