短芽孢杆菌属菌株几丁质酶分离纯化及其抗真菌活性的初步测定

以本室筛选的海洋产几丁质酶短芽孢杆菌属(Bacillus brevis sp)菌株Bspl,经往复式摇床振荡培养96 h后,发酵液先后采取75%的硫酸铵盐析、透析、几丁质亲和层析和SDS-PAGE等方法对几丁质粗酶液进行分离纯化和鉴定.几丁质亲和层析一步纯化后,经过SDS-PAGE电泳测定该酶的分子量为22.8ku,其比活力为86.65,纯化倍数为1.707,产率为32.1%.纯化的几丁质酶能抑制病原真菌的生长,对病原真菌的拮抗作用具有广谱性,对病原菌A.niger、C.albicans和B.cinerea的抑菌作用较强,抑菌带宽度较大,分别达到5.08,4.01和3.43mm,对P.capsici的抑菌作用较小,抑菌带宽度为0.56mm.同时研究了几丁质酶的稳定性,以胶态几丁质为底物,分离的几丁质酶在pH7.5,55.0℃左右具有最大酶活性;Zn2+、Cu2+和Hg2+能强烈抑制几丁质酶活性;Ni+和EDTA抑制20%～40%;5mmol/L Co2+可以使几丁质酶活性提高1.4倍;Mg2+和Ca2+等也能使酶活性增加.此项工作为具有抗真菌活性几丁质酶工业应用奠定了基础.