ABIN1对μ阿片受体活性的抑制作用 |
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引用本文: | 周培岚,赵钧如,李玉蕾,雍政,俞纲,李琳琳,苏瑞斌,宫泽辉.ABIN1对μ阿片受体活性的抑制作用[J].中国药理学与毒理学杂志,2012(3):458. |
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作者姓名: | 周培岚 赵钧如 李玉蕾 雍政 俞纲 李琳琳 苏瑞斌 宫泽辉 |
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作者单位: | 军事医学科学院毒物药物研究所 |
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基金项目: | 国家自然科学基金青年基金(30901799);北京市自然科学基金(7092078)资助 |
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摘 要: | 目的 A20结合的核因子抑制蛋白(ABIN1蛋白)是通过细菌双杂交技术筛选得到的与MOR羧基端(C-端)有相互作用的蛋白。本研究在确定ABIN1蛋白与μ阿片受体(MOR)相互作用的基础上,明确ABIN1对MOR受体激动活性及MOR激活后信号通路的影响。方法 (1)用GST-pull-down实验、免疫荧光细胞化学共定位及免疫共沉淀(Co-IP)实验验证ABIN1与MOR-C有无相互作用。(2)建立稳定转染ABIN1与MOR的CHO细胞株,用3H]diprenorphine进行受体配体结合实验,观察ABIN1对MOR与配体结合力的影响。(3)用35S]GTP-γS实验,观察ABIN1对MOR激动活性的影响。(4)通过SDS-PAGE电泳观察ABIN1对MOR激活后受体磷酸化及ERK/p-ERK水平的影响,通过cAMP含量测定确定ABIN1对DAMGO急性作用于MOR抑制cAMP作用的影响。结果 GST-pulldown实验在细胞外证明ABIN1与MOR-C有相互作用,免疫荧光细胞化学共定位实验表明ABIN1与MOR在胞膜存在共定位,Co-IP实验证明在细胞水平ABIN1与MOR有相互作用。3H]diprenorphine受体配体结合实验表明ABIN1对MOR受体配体亲和力没有明显影响,35S]GTP-γS实验证明ABIN1能够抑制激动剂对MOR的激动活性,EC50值显著增加(P<0.05)。量效曲线右移。ABIN1能够明显抑制DAMGO作用于MOR后对cAMP含量的降低作用(P<0.05),ABIN1明显抑制MOR的磷酸化(P<0.05),ABIN1对MOR激活后的p-ERK水平有明显的抑制作用(P<0.01),对ERK水平没有明显影响。结论 ABIN1与MOR相互作用后抑制MOR受体激动活性、MOR的磷酸化及受体后信号通路。
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关 键 词: | ABIN1 受体μ阿片 抑制作用 |
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