MIIP真核表达载体的构建及其稳定过表达MDA-MB-231细胞系的建立 |
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引用本文: | 徐荣荣,裴秀英,吕叶,马锐,苏芹,金彦国,陈捷珲,高玉婧.MIIP真核表达载体的构建及其稳定过表达MDA-MB-231细胞系的建立[J].宁夏医科大学学报,2016(4):376-380. |
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作者姓名: | 徐荣荣 裴秀英 吕叶 马锐 苏芹 金彦国 陈捷珲 高玉婧 |
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作者单位: | 宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室基础医学院生物化学与分子生物学系;宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤内科 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(81101601,81460420);宁夏自然科学基金(NZ15158) |
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摘 要: | 目的构建pCDNA3.0-MIIP真核表达载体并建立其稳定转染的MDA-MB-231细胞系。方法pGEX-4T-1-MIIP重组质粒及pCDNA3.0真核表达载体分别经Xho I和EcoR I双酶切后,回收目的基因,T4 DNA连接酶连接后,转化得到pCDNA3.0-MIIP重组真核表达载体,对其进行双酶切和测序鉴定。脂质体法将鉴定后的pCDNA3.0-MIIP质粒转染至人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别于转染后48和72h提取细胞总RNA,QRT-PCR法确定其转染。G418筛选转染细胞,Western blot检测目的蛋白表达。结果酶切及测序结果证实pc DNA3.0-MIIP真核表达载体构建成功。pcDNA3.0-MIIP转染至MDA-MB-231细胞后,QRT-PCR检测证实MIIP表达显著增强。G418筛选后得到单克隆细胞群,Western blot检测证实MIIP表达显著增强。结论成功构建出了可在真核细胞中高效表达MIIP基因的pc DNA3.0-MIIP重组质粒;建立了稳定过表达MIIP的MDA-MB-231细胞系。
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关 键 词: | MIIP基因 真核表达载体 MDA-MB-231 细胞转染 |
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