| 重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体的构建 |
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| 引用本文： | 杨民,马庆军,郭均,党耕町. 重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体的构建[J]. 中国骨与关节损伤杂志, 2005, 20(7): 458-461 |
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| 作者姓名： | 杨民 马庆军 郭均 党耕町 |
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| 作者单位： | 北京大学第三医院骨科,北京市,100083 |
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| 基金项目： | 基金项目：国家自然科学基金（编号：No.30170947） |
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| 摘 要： | 目的构建重组人骨形态发生蛋白7(hBMP7)的腺相关病毒(AAV)载体。方法通过RT-PCR方法,从HEK293细胞中扩增hBMP7全长cDNA并亚克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV。将pSNAV-hBMP7质粒DNA转染BHK-21细胞,筛选出携带hBMP7的AAV载体细胞株—BHK-21细胞。用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2按MOI=0·1感染BHK-21载体细胞株后收获病毒液,通过氯仿—PEG/NaCl沉淀—氯仿抽提纯化病毒。结果所克隆的hBMP7全长cDNA经测序证实和已知hBMP7序列完全一致。通过用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2感染携带hBMP7基因的AAV载体细胞株BHK-21细胞的方法获得了滴度为2×1012vg/ml、纯度达99%的重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体(AAV-hBMP7)。结论RT-PCR方法从HEK293细胞中扩增克隆hBMP全长cDNA是一种有效可行的方法。成功地构建了高滴度、高纯度的AAV-hBMP7载体,为进一步体内及体外研究基因治疗促进骨愈合提供了有力的工具。
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| 关 键 词： | 重组人骨 形态发生蛋白7 病毒载体 hBMP7 腺相关病毒 AAV |
| 收稿时间： | 2004-12-06 |
| 修稿时间： | 2004-12-06 |
Construction of an Adeno - associated Virus Vector Carrying Human Bone Morphogenetic Protein - 7 gene |
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| Yang Min,Ma Qinjun,Guo Jun,et al.. Construction of an Adeno - associated Virus Vector Carrying Human Bone Morphogenetic Protein - 7 gene[J]. Chinese Journal of Bone and Joint Injury, 2005, 20(7): 458-461 |
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| Authors: | Yang Min Ma Qinjun Guo Jun et al. |
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| Affiliation: | Yang Min,Ma Qinjun,Guo Jun,et al.Department of Orthopedics,the Third Hospital of Peking University,Beijing,100083 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bone morphogenetic protein- 7 Adeno- associated virus Gene cloning |
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