缺血皮质神经元DNA单链损伤引发Noxa表达的研究

目的：观察类缺血损伤神经元再灌注不同时间点DNA单链损伤情况和BH3－only家族成员Noxa的表达情况，初步研究DNA单链损伤与Noxa的表达关系。方法：应用β-Tubulin及Gap-43对培养的皮质神经元进行鉴定。利用流式细胞仪对培养的皮质神经元类缺血再灌注损伤后Noxa的表达情况进行研究。DNA聚合酶－IKlenow片段介导的dATP－生物素切口末端标记方法（Klenow法）对缺血再灌注各时间点培养的神经元进行检测，并应用图象分析仪对Klenow法检测的结果进行平均灰度检测。结果：应用β－Tubulin及Gap-43培养的神经元80％为纯神经元，给予神经元类缺血处理后，在再灌注不同时间点Noxa的表达为在再灌注0．5，1h最强，而后随着再灌注时间的延长，Noxa的表达下降，Klenow法检测发现未经缺血处理的对照组神经元平均灰度为72．4&;#177;1．0，到达2h达高峰135．5&;#177;1．3，而后又逐渐降低，24h几乎看不到阳性细胞。结论：培养的皮质神经元类缺血再灌注处理后有Noxa的表达，在再灌注0．5h和1h为Noxa的表达高峰，DNA单链损伤高峰为2h,Noxa的表达高峰时间点早于DNA单链损伤高峰的时间点，说明NOXA的表达可能还有其他形式的DNA损伤介入。