重组小鼠凝血因子Ⅶ毕赤酵母表达载体的构建及整合体的筛选 |
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引用本文: | 项贵明,杨峥嵘,粟永萍,程天民.重组小鼠凝血因子Ⅶ毕赤酵母表达载体的构建及整合体的筛选[J].第三军医大学学报,2005,27(20):2009-2011. |
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作者姓名: | 项贵明 杨峥嵘 粟永萍 程天民 |
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作者单位: | 第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所,第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所,第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所,第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆400038,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆400038,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆400038,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆400038 |
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基金项目: | 重庆市院士专项基金资助项目(20036317)~~ |
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摘 要: | 目的构建无凝血活性的重组小鼠凝血因子Ⅶ(rmFⅦ)毕赤酵母分泌型表达载体,获得高拷贝稳定整合菌株,为大量获得rmFⅦ蛋白,进行功能研究及其临床应用奠定基础。方法PCR扩增得到mFⅦ基因片段,插入酵母表达载体pPIC9K的α分泌信号开放阅读框的下游,再经定点突变(K341A)得到pPIC9KrmFⅦ,测序正确的质粒用SacⅠ线性化后电穿孔转化毕赤酵母GS115,G418梯度筛选转化菌,PCR鉴定目的基因的整合。结果获得了rmFⅦ毕赤酵母表达载体pPIC9KrmFⅦ,G418抗性筛选得到高拷贝菌株,PCR证实目的基因已整合到毕赤酵母染色体中。结论成功构建了rmFⅦ毕赤酵母表达载体,获得了高拷贝稳定整合菌株,为大规模表达纯化rmFⅦ蛋白及后续研究奠定了基础。
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关 键 词: | 小鼠凝血因子Ⅶ 毕赤酵母 基因重组 |
文章编号: | 1000-5404(2005)20-2009-03 |
收稿时间: | 2005-04-11 |
修稿时间: | 2005-08-16 |
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