| 重组小鼠凝血因子Ⅶ毕赤酵母表达载体的构建及整合体的筛选 |
| |
| 引用本文： | 项贵明,杨峥嵘,粟永萍,程天民.重组小鼠凝血因子Ⅶ毕赤酵母表达载体的构建及整合体的筛选[J].第三军医大学学报,2005,27(20):2009-2011. |
| |
| 作者姓名： | 项贵明 杨峥嵘 粟永萍 程天民 |
| |
| 作者单位： | 第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所，第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所，第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所，第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆400038，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆400038，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆400038，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆400038 |
| |
| 基金项目： | 重庆市院士专项基金资助项目(20036317)~~ |
| |
| 摘 要： | 目的构建无凝血活性的重组小鼠凝血因子Ⅶ(rmFⅦ)毕赤酵母分泌型表达载体,获得高拷贝稳定整合菌株,为大量获得rmFⅦ蛋白,进行功能研究及其临床应用奠定基础。方法PCR扩增得到mFⅦ基因片段,插入酵母表达载体pPIC9K的α分泌信号开放阅读框的下游,再经定点突变(K341A)得到pPIC9KrmFⅦ,测序正确的质粒用SacⅠ线性化后电穿孔转化毕赤酵母GS115,G418梯度筛选转化菌,PCR鉴定目的基因的整合。结果获得了rmFⅦ毕赤酵母表达载体pPIC9KrmFⅦ,G418抗性筛选得到高拷贝菌株,PCR证实目的基因已整合到毕赤酵母染色体中。结论成功构建了rmFⅦ毕赤酵母表达载体,获得了高拷贝稳定整合菌株,为大规模表达纯化rmFⅦ蛋白及后续研究奠定了基础。
|
| 关 键 词： | 小鼠凝血因子Ⅶ 毕赤酵母 基因重组 |
| 文章编号： | 1000-5404(2005)20-2009-03 |
| 收稿时间： | 2005-04-11 |
| 修稿时间： | 2005-08-16 |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
