MTS1基因β启动子E2F1结合位点序列突变重组质粒的构建与表达 |
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引用本文: | 冯文莉,刘兴,黄宗干.MTS1基因β启动子E2F1结合位点序列突变重组质粒的构建与表达[J].癌变.畸变.突变,2003,15(1):5-9. |
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作者姓名: | 冯文莉 刘兴 黄宗干 |
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作者单位: | 1. 重庆医科大学医学检验系临床血液学教研室,重庆,400016 2. 重庆医科大学临床学院血液科,重庆,400016 |
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基金项目: | 重庆市卫生局资助项目;992036; |
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摘 要: | 目的:深入研究MTS1基因β启动子的转录激活与E2F1转录因子的相互作用关系,阐明该转录水平的调控机制。方法:用PCR定点突变方法或酶切连接法,构建β启动子0.38kb SacⅡ-Sac I酶切片段中E2F1 A,B,C任意2个位点或3个位点均突变的pGL3重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建的重组质粒转染MTS1基因双等位缺失的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞,检测pGL3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果:构建的E2F1 A,B,C结合位点突变的重组质粒经Sac I或Nae I酶切鉴定和DNA序列分析得到证实。与E2F1位点野生型重组质粒比较,突变型重组质粒在Jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少,以3个位点均突变的重组质粒为明显。结论:构建的E2F1 A,B,C2个或3个结合位点均突变重组质粒成功,可通过基因转染用于研究MTS1基因的功能试验中;MTS1基因β启动子的转录活性可能与E2F1转录因子的反式激活有关。
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关 键 词: | MTS 1基因 E 2 F 1转录因子 基因突变 |
文章编号: | 1004-616X(2003)01-0005-05 |
修稿时间: | 2002年5月21日 |
CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF THE RECOMBINANT PLASMID OF THE MTS1 GENE β PROMOTER ON E2F1-BOUND LOCUS MUTATION |
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