雌二醇对人羊膜间充质干细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究不同浓度雌二醇（estradiol，E2）对人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stromal cells，HAMSCs）体外培养中增殖、凋亡的影响。方法：采用改良酶消化法提取HAMSCs，流式细胞学方法和免疫荧光法鉴定提取细胞。HAMSCs培养方法分为对照组和E2组（分别加入浓度为10-5、10-6、10-7、10-8 mol/L E2）。CCK-8检测各组HAMSCs增殖情况；qRT-PCR检测干细胞特异基因Oct-4和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达；Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：CCK-8检测显示各浓度E2组和对照组的HAMSCs增殖活性在1~6 d都随时间的变化而变化（F时间=2 418.132，P时间=0.000）；各浓度E2组在1~4 d的增殖率与对照组无明显差异；4 d后，各浓度E2组的增殖率明显高于对照组（F组别=246.601，P组别=0.000），各浓度组间无明显差异。qRT-PCR检测显示10-6 mol/L E2组（1.00±0.10）的Oct-4 mRNA表达水平较对照组（0.58±0.16）和其他E2浓度组（1.31±0.22、0.81±0.04、0.78±0.07）上调（P=0.000，P=0.020，P=0.001，P=0.000）；除10-6 mol/L E2组（0.83±0.47，P=0.084）外，其他E2浓度组（0.49±0.25、0.38±0.19、0.32±0.10）抗凋亡基因Bcl-2基因表达量均较对照组（1.06±0.13）下调（P=0.038，P=0.015，P=0.010）。10-5 mol/L E2组（2.20±0.58）的Bax基因较对照组、其他E2浓度组（1.00±0.05、1.52±0.38、1.38±0.17、1.17±0.19）上调（P=0.001，P=0.028，P=0.012，P=0.003）。Western blot检测提示10-5 mol/L E2组（0.514±0.014）的促凋亡蛋白表达Bax较对照组（0.201±0.017）明显上调（P=0.000），而抗凋亡蛋白Bcl-2（0.366±0.024）与对照组（0.215±0.080）之间差异无统计学意义（P=0.055）。而10-6 mol/L E2组（0.378±0.016）的促凋亡蛋白Bax较其他浓度E2组（0.514±0.014、0.547±0.036、0.577±0.028）表达降低（P=0.000）。结论：E2促进HAMSCs的增殖呈时间依赖性，高浓度E2（10-5 mol/L）促进HAMSCs凋亡，较高浓度E2（10-6 mol/L）维持HAMSCs活性并保护其分化潜能。

Effects of estradiol on proliferation and apoptosis in human amniotic mesenchymal stromal cells