二甲双胍通过干预上皮-间质转化逆转尼古丁诱导的肺癌吉非替尼耐药

目的：探讨尼古丁（nicotine，NIC）诱导EGFR敏感突变PC-9肺癌细胞株吉非替尼耐药及二甲双胍对其作用。方法：PC-9分成4组：空白组、尼古丁组、二甲双胍组、尼古丁和二甲双胍组，利用定量反转录聚合酶连锁反应（quantificational real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测E-cadherin和Vimentin信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid，mRNA）的表达，Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达，细胞计数试剂盒（cell counting Kit-8，CCK-8）检测不同分组细胞对吉非替尼药物敏感情况。Transwell小室实验检测细胞侵袭迁移。结果：尼古丁诱导PC-9细胞上皮间质转化呈时间浓度依赖，在10 μmol/L尼古丁处理72 h后，发生E-cadherin下调和Vimentin上调最明显，故选该条件做以下实验。CCK-8提示，相比空白组，尼古丁组PC-9细胞对吉非替尼敏感性减弱，在吉非替尼浓度为0.05 μmol/L最明显（P=0.000）。Matrigel侵袭实验提示尼古丁组穿膜细胞数较空白组明显增多[（15.70±1.53）个/高倍视野 vs. （32.70±2.08）个/高倍视野，F=75.406，P=0.000，P=0.000]；迁移实验的结果与之相似。与空白组相比，尼古丁组E-cadherin mRNA 表达水平明显降低[（0.932±0.100） vs. （0.459±0.024），F=25.924，P=0.000，P=0.000）]，Vimentin mRNA表达水平明显升高[（1.200±0.200） vs. （1.973±0.129），F=20.998，P=0.000，P=0.000]。蛋白水平变化与之相同。尼古丁＋二甲双胍组可以增加尼古丁作用PC-9对吉非替尼的敏感性，在吉非替尼浓度为0.05、0.10、0.50、1.00、5.00 μmol/L时有统计学意义。尼古丁＋二甲双胍组可以减弱尼古丁组的穿膜数[（17.00±2.00）个/高倍视野vs. （32.70±2.08）个/高倍视野，F=75.406，P=0.000，P=0.000]，迁移实验呈现相同的结果。相比于尼古丁组，尼古丁＋二甲双胍组上调E-cadherin mRNA[（0.459±0.024） vs. （0.838±0.058），F=25.924，P=0.000，P=0.000）]，下调Vimentin mRNA[（1.973±0.129） vs. （1.467±0.115），F=20.998，P=0.000，P=0.003）]。结论：尼古丁通过上皮间质转化诱导PC-9细胞吉非替尼耐药，二甲双胍可以逆转上述现象。

Metformin reverses nicotine-induced gefitinib resistance by epithelial-mesenchymal transition