前列腺癌LNCaP-AI+F细胞外泌体促进基质细胞WPMY-1 功能活化

[摘要] 目的：探讨前列腺癌外泌体对基质细胞WPMY-1 迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法：超速离心法提取前列腺癌LNCaP-AI+F细胞上清中的外泌体，电镜观察外泌体的典型形态结构，Zetaview 检测外泌体的粒径分布，Wb鉴定外泌体标志蛋白及其他相关蛋白。将WPMY-1 细胞与前列腺癌外泌体（40 μg/ml）共孵育后，激光共聚焦显微镜观察WPMY-1 细胞对PKH67 标记的外泌体的摄取情况，Transwell 实验检测WPMY-1 细胞迁移和侵袭能力，qPCR检测IL-8、PDGFB和MMP9 等三种肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast，CAF)分子表达水平，Wb检测EGFR和ERK1/2 蛋白磷酸化水平。结果：电镜下可观察到典型茶托状外泌体结构，外泌体粒径分布集中在100 nm左右，其标志蛋白CD63 和ALIX的表达证实了所提取颗粒为外泌体。此外，外泌体还表达EGFR、HER2 和SRC 等三种与前列腺癌进展相关的蛋白。WPMY-1 细胞与外泌体共孵育后，共聚焦显微镜下可看到该细胞摄取大量外泌体，明显促进WPMY-1 细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01）；与对照组比较，外泌体（40 μg/ml）处理后WPMY-1 IL-8、PDGFB及MMP9 表达水平增高（P<0.05 或P<0.01）；且外泌体促进了WPMY-1 细胞EGFR和ERK1/2 的磷酸化（P<0.01）。结论：前列腺癌细胞可通过外泌体作用于基质细胞WPMY-1，使其高表达多种CAF 相关分子，促进EGFR 和ERK1/2 的磷酸化，增强其迁移和侵袭能力。

Prostate cancer LNCaP-AI+F cell-derived exosomes promote activation of stromal cell WPMY-1