| 利用噬菌体表面展示技术构建人肝癌细胞的cDNA表达文库 |
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| 引用本文： | 张林,刘杞,孙航. 利用噬菌体表面展示技术构建人肝癌细胞的cDNA表达文库[J]. 重庆医科大学学报, 2005, 30(3): 329-332,397 |
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| 作者姓名： | 张林 刘杞 孙航 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆,400010;重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆,400010;重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆,400010 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 , 科技部专项基金 |
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| 摘 要： | 目的:筛选对人肝再生增强因子(hALR)高反应性的肝癌细胞株,以此作为细胞来源,利用噬菌体展示技术构建出含有其cDNA表达文库,为进一步从文库中筛选hALR相互作用蛋白奠定基础.方法:hALR刺激不同肝癌细胞株,从中筛选出对hALR刺激有高反应性的细胞株.以Poly ATtract System1000提取mRNA,用T7Select10-3 Orient Express cDNA CloningSystem和Random Primer构建它的cDNA噬菌体表面展示文库;以噬菌体滴度分析和PCR评价文库质量.结果:hALR对不同肝癌细胞株均有不同程度的促增殖作用,且呈明显的剂量依赖关系.对QGY促增殖作用最强,以它作为建库细胞.对所建文库进行噬菌体滴度分析,表明原始cDNA文库含有2×107独立的重组子;随机挑取重组子进行PCR鉴定,发现插入长度在0.2～2kb,平均为0.6kb,能够较好地代表来源细胞中mRNA所表达的几乎所有信息.结论:hALR对所检测的肝癌细胞株均有促增殖作用;QGY细胞对hALR刺激有最高的反应性;以它为基础,构建出库容量为2×107的高质量噬菌体表面展示文库.
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| 关 键 词： | 肝再生增强因子 肝癌细胞 cDNA 噬菌体展示文库 |
| 文章编号： | 0253-3626(2005)03-0329-04 |
Construction of a phage-displayed library with cDNA of human hepatocarcinoma cell |
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| ZHANG Ling,et al. Construction of a phage-displayed library with cDNA of human hepatocarcinoma cell[J]. Journal of Chongqing Medical University, 2005, 30(3): 329-332,397 |
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| Authors: | ZHANG Ling et al |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Augmenter of liver regeneration Hepatocarcinoma cell cDNA Phage-displayed library |
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