| 人单酰基甘油脂肪酶基因的克隆表达、纯化及活性研究 |
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| 引用本文： | 朱京童,张駪,郑海洲,郑智慧,路新华,董爱华,段宝玲.人单酰基甘油脂肪酶基因的克隆表达、纯化及活性研究[J].中国抗生素杂志,2012,37(8):593-598. |
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| 作者姓名： | 朱京童 张駪 郑海洲 郑智慧 路新华 董爱华 段宝玲 |
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| 作者单位： | 1. 华北制药集团新药研究开发公司,微生物药物国家工程中心,石家庄050015
2. 四川大学生命科学院,成都,610064 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(NO.81173137).重大新药创制项目(2010ZX09401-403) |
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| 摘 要： | 目的人单酰基甘油脂肪酶(human monoacylglycerol lipase,MAGL)是一类促进脂肪分解成甘油和脂肪酸的丝氨酸水解酶,是抗肿瘤药物研发的新靶点。为了建立高通量的MAGL抑制剂筛选模型,本研究对人MAGL进行了基因克隆、体外重组表达、纯化以及活性研究。方法通过RT-PCR方法从人脑总RNA中扩增人MAGL基因,并将该基因克隆入pET28a(+)表达载体。将重组蛋白在E.coli BL21(DE3)宿主菌中通过1mmol/L IPTG诱导表达。表达产物用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱进行分离纯化,通过SDS-PAGE进行分析。以7-hydroxycoumarinyl arachidonate(7-HAC)为荧光底物进行酶的活性测定。结果成功扩增出人MAGL基因,并构建了pET28a-MAGL表达载体。SDS-PAGE检测结果表明重组人MAGL蛋白在宿主菌中的表达量可达菌体总蛋白量的25%,经Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱分离纯化后的重组蛋白纯度大于90%,其比活力达到7900IU/mg,,较纯化前提高了23倍。酶活性分析结果证明重组表达并纯化的蛋白具有单酰基甘油脂肪酶活性,另外,利用已知的MAGL抑制剂N-arachidonylmaleimide(NAM)对该酶表现出强的抑制活性,IC50值为0.53μmol/L。结论本研究成功利用大肠埃希菌原核表达体系重组表达并纯化了人单酰基甘油脂肪酶,为建立以MAGL为靶点的抗肿瘤药物筛选模型奠定了基础。
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| 关 键 词： | 肿瘤 人单酰基甘油脂肪酶 表达 纯化 |
Cloning, expression and purification of human monoacylglycerol lipase |
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| Zhu Jing-tong
,
Zhang Shen
,
Zheng Hai-zhou
,
Zheng Zhi-hui
,
Lu Xin-hua
,
Dong Ai-hua
,
Duan Bao-ling.Cloning, expression and purification of human monoacylglycerol lipase[J].Chinese Journal of Antibiotics,2012,37(8):593-598. |
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| Authors: | Zhu Jing-tong Zhang Shen Zheng Hai-zhou Zheng Zhi-hui Lu Xin-hua Dong Ai-hua Duan Bao-ling |
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| Institution: | 1(1 New Drugs Research & Development company of North China Pharmaceutical Group Corporation,National Engineering Research Center of Microbial Medicine,Shijiazhuang 050015;2 College of Life Science,Sichuan University,Chengdu 610064) |
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| Abstract: | |
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