| 结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B基因真核共表达载体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 李武,邓光存,刘晓明,王玉炯.结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B基因真核共表达载体的构建与表达[J].中国人兽共患病杂志,2013,29(8). |
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| 作者姓名： | 李武 邓光存 刘晓明 王玉炯 |
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| 作者单位： | 宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室,银川,750021 |
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| 基金项目： | the National Key Basic Research Program of China (973 Program)，the National Natural Science Foundation of China，the Research Fund for the Doctoral Program of Higher Educationof China，国家重点基础研究发展规划项目(973计划)，国家自然科学基金项目，高等学校博士学科点专项科研基金资助课题 |
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| 摘 要： | 目的 Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要优势保护抗原,为提高编码Ag85A和Ag85B DNA疫苗的免疫原性和免疫效果,特构建真核共表达Ag85A和Ag85B抗原的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,并利用293T细胞对其表达进行检测.方法 PCR扩增Ag85A和Ag85B基因,逐步将Ag85A和Ag85B基因定向插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加A信号BGH poly(A)之间,并将Ag85A和Ag85B基因以内部核糖体进入位点(internal ribo some entry site,IRES)序列连接,酶切和测序验证后将重组质粒转染至293T细胞中进行真核表达,48 h后提取细胞总蛋白,表达产物经SDS-PAGE分离和Western blot分析.结果 限制性内切酶酶切及测序结果表明,重组质粒pcDNA-Ag85AIRES-Ag85B基因序列和阅读框架正确.将重组质粒转入293T细胞后,利用Ag85A和Ag85B特异性抗体Western blot检测证实两种抗原可在同一载体中各自独立表达.结论 成功构建了能够同时独立表达结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B抗原基因的真核表达载体pcDNA-Ag85A IRES-Ag85B,为下一步研究它们的免疫原性和免疫效果奠定了基础.
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 Ag85A Ag85B 共表达 Western blot |
Construction and eukaryotic expression of a vector co-expressing Ag85A and Ag85B genes of Mycobacterium tuberculosis |
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| LI Wu
,
DENG Guang-cun
,
LIU Xiao-ming
,
WANG Yu-jiong.Construction and eukaryotic expression of a vector co-expressing Ag85A and Ag85B genes of Mycobacterium tuberculosis[J].Chinese Journal of Zoonoses,2013,29(8). |
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| Authors: | LI Wu DENG Guang-cun LIU Xiao-ming WANG Yu-jiong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mycobacterium tuberculosis Ag85A Ag85B co-expression Western blot |
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