pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位 |
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引用本文: | 谭家余,陈敬林,黄湘,李冬秀,袁春雷,万志丹.pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位[J].中国免疫学杂志,2014(11):1504-1507. |
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作者姓名: | 谭家余 陈敬林 黄湘 李冬秀 袁春雷 万志丹 |
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作者单位: | 南方医科大学附属中山市博爱医院中心ICU;南方医科大学附属中山市博爱医院产前诊断中心;南方医科大学附属中山市博爱医院检验科 |
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摘 要: | 目的:构建pCDNA3.1-MT2A真核表达载体并观察其在293T和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法:使用基因合成法合成MT2A基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3.1(+)载体的BamHⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。将鉴定正确的pCDNA3.1-MT2A质粒采用脂质体法转染293T和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果:pCDNA3.1-MT2A重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因MT2A的序列完全正确,真核表达载体构建成功,激光共聚焦观察发现该重组质粒表达于293T和SMMC7721细胞的胞质中。结论:成功构建pCDNA3.1-MT2A融合基因并进行真核表达,发现MT2A主要定位于293T和SMMC7721细胞的细胞质中。本研究为探讨MT2A在肝癌细胞内的功能奠定了基础。
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关 键 词: | MT2A 载体构建 细胞定位 |
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