αA晶体蛋白基因启动子与HSP70融合基因表达载体的构建及鉴定

目的构建αA晶体蛋白基因启动子与HSP70融合基因表达载体pαACP-HSP70。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术,从质粒pIRES2-EGFP-HSP70中扩增HSP70基因,将已构建的含αA晶状体蛋白基因特异性启动子活性片段(αACP)的质粒pαACP-IRES2-EGFP双酶切,回收载体片段,利用基因重组技术,将HSP70基因片段定向插入载体启动子αACP之后,构建特异性表达载体,命名为pαACP-HSP70,并通过PCR、酶切和DNA测序进行鉴定。结果构建的pαACP-HSP70质粒通过酶切图谱鉴定、PCR检测有1924 bp条带出现,通过测序显示所克隆的HSP70基因与基因库中的同种序列比较,核苷酸序列有100%的同源性。结论成功构建了晶状体上皮细胞特异性表达载体pαACP-HSP70。