用β-escin穿孔膜片箝技术记录豚鼠心室肌细胞L-型钙电流

目的:用β-escin在豚鼠心室肌细胞建立穿孔膜片箝技术(PPR),并记录L-型钙电流(I_(Ca,L)),与传统的全细胞记录(WCR)模式相比较。方法:用酶消化法分离单个心室肌细胞,将β-escin配在电极内液中穿孔心室肌细胞膜形成PPR模式,用WCR及PPR技术记录心室肌细胞I_(Ca,L),结果:β-escin 20,25,30μmol/L可在心室肌细胞膜穿孔形成PPR模式,用β-escin 25μmol/L成功率最高(16/17,94％),用PPR模式记录的I_(Ca,L)其衰减明显比WCR方式记录的慢,I_(Ca,L)幅值在WCR形成后20min减小36％,而在PPR形成后30min仅缓慢减小8％,在两种模式下,I_(Ca,L)的I-V曲线,激活和失活曲线无显著差异,在PPR模式下,I_(Ca,L)的失活速率比在WCR模式下慢,在-20mV-+10mV电压下,其快失活相时间常数(τ_f)比WCR长(n=6,P<0.05),在-10mV-+10mV电压下,其慢失活相时间常数(τ_s)也比WCR长(n=6,P<0.05),在两种方式下,I_(Ca,L)的激活速率无显著差异。结论:用β-escin25μmol/L在豚鼠心室肌细胞能得到较稳定的PPR模式,此方法可以用于在普通的WCR模式下衰减较明显的电流如L-型钙电流的记录。