103. c-Ha-rasV12G基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立

目的：建立促癌剂检测模型。方法：采用电穿孔的方法，将突变的c-Ha-rasV12G基因转入人胚肺成纤维细胞WI-38及人支气管上皮细胞BEAS-2B中，将获得的G418抗性(G418r)单克隆细胞株进行DNA-DOT-Bloting及RT-PCR分析后，进一步用促癌剂佛波醇酯(PMA)处理，并选用克隆形成率(CFE)、锚着独立性生长(AIG)、血清抗性及裸鼠成瘤性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测。结果：c-Ha-rasV12G基因使细胞对促癌剂的促癌敏感性增强，其中，对于WI38 G418r细胞，当PMA剂量分别为0、3.125×10-5、 6.25×10-5、1.25×10-4、2.5×10-4及0.5×10-3 (mol*L-1)时，其在含体积分数为1%FBS的1640培养基中的克隆形成率分别7、8、11、12、15及14 (/200cells)，在含体积分数为10% FBS的培养基中分别为76、92、106、109、127及173 (/200cells)，在质量浓度为0.33%的琼脂中为47、61、70、69、80及97(/1 000cells)。选取0.5×10-5mol*L-1剂量组处理的G418r细胞进行裸鼠成瘤性实验，结果阳性。对照非基因转染细胞，用0.5×10-5mol*L-1 PMA处理后，在3种培养基中相应的克隆形成情况为3、33/200cells, 0/1 000cells，裸鼠皮下注射部位无肿瘤生长。PMA以0、2.0×10-5、1.0×10-4、5.0×10-4、1.0×10-3及1.6×10-3(mol*L-1)分别作用24 h，结果1.0×10-4mol*L-1剂量作用使BEAS-2B G418r细胞获得了最高的血清抗性及CFE，表现为在含体积分数为0.8%、0%FBS的LHC-8培养基及软琼脂中的CFE分别为190%、150%及75%(对照非基因转染细胞在不含PMA及FBS的LHC-8中CFE计为100%)，对照细胞在含体积分数为0.8%FBS的培养基及软琼脂中不能生长，随着PMA处理剂量的增加，其CFE逐渐降低。结论：c-Ha-rasV12G基因可使上皮细胞BEAS-2B获得对PMA的促癌作用敏感性，其中当PMA剂量1.0×10-4mol*L-1时，可发挥促癌作用，大于该剂量则有促分化作用；上皮细胞发生恶性转化的标志之一是细胞对FBS、PMA等促分化剂的促细胞分化抗性增强。