| 大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞的体外培养与鉴定 |
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| 引用本文： | 邓志锋,鲁友明,汪泱,娄远蕾,郭菲,谢安.大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞的体外培养与鉴定[J].中国组织工程研究与临床康复,2008,12(16):3069-3073. |
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| 作者姓名： | 邓志锋 鲁友明 汪泱 娄远蕾 郭菲 谢安 |
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| 作者单位： | 1. 南昌大学第二附属医院神经外科,江西省南昌市,330006
2. 南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所,江西省南昌市,330006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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江西省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:目前内皮祖细胞主要从骨髓、脐带血和外周血获取,但其分离培养方法尚不成熟,外周血来源因损伤小、易获取而被普遍使用,但得到的内皮祖细胞纯度较低.实验拟探讨大鼠骨髓来源内皮祖细胞体外培养、诱导扩增和生物学特性鉴定方法.方法:实验于2006-08/2007-08 在南昌大学第一附属医院泌外研究所完成.①实验材料:2周龄SD大鼠由南昌大学医学院动科部提供,雌雄不拘,清洁级,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:应用梯度离心法采集大鼠骨髓单个核细胞,贴壁筛选法分离内皮祖细胞,置于添加了血管内皮细胞生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、表皮生长因子的M199培养液中扩增培养,对培养2周的细胞采用免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、血管内皮生长因子受体-2、CD34、CD133, 采用RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因表达.结果:①培养4 d,光电显微镜下可见细胞集落形成,梭形贴壁细胞从集落中央以放射状向外周生长.培养7～10 d,细胞集落相互连接,呈典型的"鹅卵石"样外观.2周左右可见细胞排列成条索状结构并可呈"微血管样"排列生长.②贴壁细胞免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、FLK-1、CD34、CD133阳性,RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因阳性表达.结论:采用梯度离心法从骨髓中分离单个核细胞,经诱导培养可实现内皮祖细胞的分离培养和体外扩增.
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| 关 键 词： | 内皮祖细胞 骨髓源性 体外培养 大鼠骨髓 源性 血管内皮祖细胞 培养与鉴定 bone marrow progenitor cells endothelial identification culture 体外扩增 分离培养 诱导培养 单个核细胞 基因阳性表达 微血管 结构 鹅卵石 互连接 细胞集落 生长 |
| 文章编号： | 1673-8225(2008)16-03069-05 |
| 修稿时间： | 2007年11月20 |
In vitro culture and identification of endothelial progenitor cells from rat bone marrow |
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| Deng Zhi-feng,Lu You-ming,Wang Yang,Lou Yuan-lei,Guo Fei,Xie An.In vitro culture and identification of endothelial progenitor cells from rat bone marrow[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2008,12(16):3069-3073. |
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| Authors: | Deng Zhi-feng Lu You-ming Wang Yang Lou Yuan-lei Guo Fei Xie An |
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